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病毒包装平台
中洪博元目前提供腺病毒、慢病毒与逆转录病毒表达系统，包括载体构建与病毒包装。您可以根据实验需要，选择合适的载体系统。
慢病毒系统
慢病毒（Lentivirus ）载体是以HIV-1 （人类免疫缺陷I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力，因此它可以有效地感染包括神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等在内的几乎所有的哺乳动物细胞，并且感染效率非常高，是传统方法的数倍甚至数十倍。慢病毒可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达，是目前最受欢迎的基因功能研究工具。慢病毒的研究发展很快，也很深入，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，预示着慢病毒有着广阔的应用前景。
慢病毒系统组成
1、一个表达载体，含有目的基因、目的基因的启动子以及其它病毒包装所需的必要元件；
2、一套包含三个辅助质粒的包装质粒Mix，分别表达产生病毒所需的结构蛋白和逆转录酶；
3、293FT 细胞株，能够在表达载体和包装质粒mix 共转染后包装出慢病毒。
系统优势
1、生产出以HIV-1 为基础的慢病毒，它能有效地转导分裂和非分裂的哺乳动物细胞，因此它的应用潜能超过传统的以MLV 为基础的逆转录系统。
2、无论靶细胞是在体内还是体外培养，慢病毒都能有效地将外源基因携带进去。相比传统腺病毒的瞬时转染，慢病毒能够将目的基因整合到宿主基因组，从而能够长期稳定地表达。
3、宿主非常广泛，包括人、猩猩、小鼠、大鼠、兔、狗等所有已经研究过的哺乳动物。
4、表达载体和包装质粒形成反式互补，且包装质粒又分别由三个质粒构成，从而为安全性提供了更加可靠的保障。
可选的载体元件列表
中洪的载体元件库可以为您提供包罗万象的载体元件，包括大家熟悉的广泛表达启动子，也包括丰富的组织特异性表达启动子、各种颜色荧光标记基因、化学发光标记、色度法筛选基因、正负筛选基因、可诱导的rtTA 基因、双顺反子，标签蛋白等，均可根据您的要求进行选择。
慢病毒转染案例
293T细胞 293T细胞
腺病毒系统
采用中洪生产出的腺病毒，它既能把外源基因携带进分裂细胞表达，又能把外源基因携带进非分裂细胞表达。
系统组成：
1、一个表达载体，含有目的基因、目的基因的启动子以及一些把这个载体包装进病毒的元件；
2、293A 细胞株，能够在表达载体转染后包装出腺病毒；
系统优势：
1、宿主范围广 -腺病毒可感染种类广泛的有丝分裂后期细胞；
2、包装容量大 -包装容量可以达到6 kb；
3、病毒滴度高 -病毒活性滴度达到1011 PFU/mL。
腺病毒转染案例
腺病毒包装-出毒 感染293A细胞
逆转录病毒载体系统
系统组成：
1、一个含有目的基因的表达载体；
2、一个编码VSV-G 的辅助质粒；
3、表达gag/pol 的辅助质粒；
4、293T 包装细胞。
系统优势：
1、转导效率高，能够有效提高基因的转染率；
2、相对于腺病毒来说，能够稳定整合到细胞的基因组中，能够稳定遗传。
慢病毒技术服务
中洪 的 shRNA 慢病毒载体是由U6 启动子驱动shRNA 实现，并连接了eGFP，可以实时监测载体的转染效率，同时还包含Amp 抗性基因，可以无限制扩增。
shRNA 慢病毒系统作用示意图
设计shRNA 靶序列
一般情况下，中洪将根据客户的目的 mRNA 靶基因，分别设计 3 条不同的shRNA 序列，shRNA 序列一般为 19 - 21bp 长。也可以按照客户的要求来设计，由客户确定shRNA 序列的长度。 对于每条选定的靶序列，设计正义链和反义链，以 loop(9nt ) 相连，合成shRNA（short hairpin RNA）。
shRNA 慢病毒载体构建
中洪 可为客户合成shRNA、双酶切shRNA 空载体、连接与转化、测序鉴定、载体制备及定量。
shRNA 慢病毒包装
中洪 可将构建好的shRNA 慢病毒载体包装成具有高转染效率的慢病毒，并提供病毒滴度检测服务。
实验结果
携带shRNA 的慢病毒载体、慢病毒及测序结果等。
优点
1、长时间抑制靶基因的表达，可持续数周；
2、相对其他RNAi 方法，成功率高，而且knockdown 更彻底；
3、在Tet-on 系统中可诱导抑制靶基因的表达；
4、用shRNA 慢病毒载体，大大提高了转导率。
三套病毒系统比较
