•  荧光染色后一般在1h内完成观察，或于4℃保存4h，时间过长 ，会使荧光减弱。

•  每次试验时 ，需设置以下三种对照：

–  阳性对照：阳性血清+荧光标记物

–  阴性对照：阴性血清+荧光标记物

–  荧光标记物对照：PBS+荧光标记物

•  标本片需在操作的各个步骤中，始终保持湿润，避免干燥。

•  一抗和二抗应始终保持在标本片上，避免因放置不平使液体流失，从而造成非特异性荧光染色。