质量上乘的ＨＥ染色切片是病理医师作出正确病理诊断的关键。ＨＥ染色是一种多步骤、多因素的染色方法，不管是机器还是手工操作，均存在许多影响因素，甚至出现不理想的染色结果，从而导致误诊。本文分析ＨＥ染色中容易出现的问题和应对方法，现介绍如下。

1、切片污染：染液、组织及盖、载玻片的污染

分析：

（1）染液污染是由苏木精染液的氧化膜或其它试剂的沉淀物所致。

（2）组织污染是由于取材、包埋、裱片时，前后标本相互污染引起。

（3）玻片污染是误用了过期涂胶玻片，霉变盖、载玻片，或被其它杂质污染了的盖、载玻片

应对：

（1）为防止染液污染可通过定期过滤各种染液和试剂，或使用Gill苏木精染液。一般常用的Harris和Gill苏木精染液，配制Harris苏木精时采用的氧化剂为氧化汞，氧化汞需在配制过程中加热才能产生氧化作用，但加热后的氧化汞容易形成氧化膜；而配制Gill苏木精时采用的氧化剂为碘酸钠，常温下加入即可起氧化作用，不会产生氧化膜；因此，为避免过多氧化膜，使用Gill苏木精染液较好。广东病理人家收集整理

（2）为防止组织污染应在每例标本取材和包埋后，清理干净取材台、包埋台及器械，再行下一标本操作；每天更换裱片水，裱片前先把残余蜡片清理干净，如：可用干净的纸片把水面捞干净，做到一片一裱。

（3）避免使用过期涂胶玻片或霉变盖、载玻片，可根据需求适量订购盖玻片和载玻片；亦可将玻片存放在密闭干燥的环境，如电子恒温干燥箱备用。因涂胶载玻片裱贴组织行ＨＥ染色时，易引起苏木精、伊红等染液与胶液产生作用而影响美观；若使用霉变玻片，可将玻片经３％苯酚水溶液足够浸泡、流水冲洗，纱布擦干后备用；如盖玻片被污染，移去盖玻片，重新用干净的盖玻片封片即可。

2、部分组织和细胞染色尚可，部分模糊不清

分析：

染色时切片脱蜡不彻底。常见于切片在脱蜡前烘烤不够，室温低时，透明剂的脱蜡力度降低，或使用脱蜡过久的透明剂所致

应对：加强切片烘烤力度，室温低（２５℃以下）时，可将透明剂置入４０℃左右烤箱加温备用，或更换新的透明剂，褪色、漂白，重新染色。脱蜡时可将切片在透明剂里上下提放几次，加速脱蜡。如使用自动染色机，可设置上下振荡功能。

3、细胞核模糊不清，核不着染，灰白色，有时仅见细胞轮廓

分析：

组织固定脱水不当或不及时引起组织发白、发软、自溶；也与组织的致密度和天气情况有关，遇致密度高的组织和气温低下时，固定液的渗透力会相应减弱。

应对：

活体组织离体后，应立即使用适量１０％中性福尔马林固定，大组织或致密组织切开彻底固定，取材后可用ＡＡＦ固定液或１０％中性福尔马林再固定，效果极佳。细胞核灰白者，移除盖玻片，透明剂脱胶、乙醇脱透明剂、水洗，经褪色、漂白，2%硫酸铁铵媒染后，重新染色，可获得一定效果。遇组织软难以制片时，可将包埋块的蜡溶解，重新入脱水机脱水、透明、浸蜡后制片，效果会得到改善。对固定不佳的组织，在条件允许情况下，应按规范重新取材、固定后制片。

4、细胞和纤维排列致密，核深染，核染色质呈团块状

分析：

组织脱水、透明、浸蜡时温度过高，时间过长，导致组织和细胞过度固缩。

应对：保证脱水、透明、浸蜡温度、时间的恒定，浸蜡一般以６５℃为宜。如脱水机浸蜡足够，组织包埋时可不必再浸蜡，直接包埋即可，避免过度浸蜡损伤组织。

5、切片在镜下呈现“裸核”现象

分析：

“裸核”是切片在封片前过度干燥，部分胞核透明不良，镜下细胞核呈黑色。

应对：

（1）在染色过程中不宜让切片干涸，染色后不要直接把切片置入烤箱烤干或吹风吹干，待自然干燥后中性树胶封固即可。

（2）将出现“裸核”的切片，移去盖玻片，经透明剂稍浸片刻后取出，适当晾干，中性树胶封固，“裸核”即消失。

6、镜下组织切片结构不清，淡蓝染，核溶解，部分组织呈深蓝色块状

分析：

这是由于电灼高温引起的组织变形，常见于黏膜息肉电切、前列腺经尿道电切、子宫颈锥切等组织。

应对：

电切组织取材时，应远离切缘，尽量减少对组织切片制片的影响。

7、甲醛色素沉积：切片中出现棕黑色无定形颗粒

分析：

由含血丰富的组织经酸性甲醛液固定后，形成酸性甲醛正铁血红素复合物所致，色素沉积影响了切片的清晰和美观。

应对：使用10%中性福尔马林固定组织，可防止色素形成。一般甲醛液固定时间不超过48ｈ，此色素也可减少。如已形成这种色素，可在切片脱蜡至水后，置入１％ＫＯＨ-75％乙醇液内处理30ｍｉｎ，流水冲洗15ｍｉｎ，色素便可溶解消失。

8、切片呈云雾状或镜下水印

分析：

由于染片后脱水不彻底，中性树胶封固后切片内含有水分所致。

应对：

移去盖玻片，使用透明剂洗去树胶，再用无水乙醇洗去透明剂，重新脱水待干后，中性树胶封固。脱水的乙醇应定期更换，保证切片脱水彻底。

9、切片内有大小不一的气泡

分析：

（1）树胶过浓、过稀，或封片前搅动树胶产生气泡。

（2）气泡的出现与封片技巧也息息相关。

（3）切片上有不平杂质或脱钙组织。

（4）切片上盖有多张盖玻片，尤其在自动封片机封片时易产生。气泡的出现，既影响美观，又妨碍阅片。

应对：

（1）封片用的树胶浓度要适中，封片时不要随意搅动树胶。

（2）滴树胶后，将盖玻片的一侧先接触树胶再慢慢放下盖玻片。

（3）移去盖玻片，将切片上的不平杂质去除，重新盖片；脱钙组织因切片不平整，可多滴点树胶再行盖片。

（4）盖玻片受潮后易多张粘贴在一起，为避免可在使用时再准备，或在使用前置入烤箱适当烘烤冷却后备用。为了生物安全，操作人员应戴上口罩，在抽风橱内进行封片。如有条件，最好能用自动封片机封固。