此步骤在技术员协助下由病理医师完成。取材的好坏，直接影响切片的质量。医生在取材时，首先要有一把锋利的取材刀，在切割组织时要避免取材刀来回拖拉，切取的组织块厚薄要均匀，一般厚度以0.2 ～0.3cm为适，较容易发脆的组织如甲状腺、肝脏、血块、淋巴结、大块癌组织等可适当厚一点，而脂肪组织、肺组织、纤维性肿瘤、平滑肌瘤等致密的或试剂不易渗入的组织应取薄一些；淋巴结应修掉两侧球冠，并尽量剔除周围的脂肪组织。在取材中还应十分注意组织内是否有缝线或骨组织，如碰到不可避免的钙化组织，应与技术室讲明，在切取纤维组织、肌肉组织、胃肠道时，应注意纤维及肌肉的走向，取材时尽可能按与纤维平行走向切取为佳。

       固定是技术室工作的第一步，也是在整个制片过程中无法补救的一步。所谓“固定”，就是组织离体后，用各种办法使其细胞内的物质尽量接近其生活状态时的形态结构和位 置的过程。固定的目的是为了防止组织细胞自溶与腐败，防止了细胞内的酶对蛋白质的分解作用，使细胞内的各和成分如蛋白质、脂肪、碳水化合物或酶类转变为不溶性物质，以 保持原有的结构与生活时相仿。另外，组织固定后，均呈一定的硬化状态，增加组织韧性，而且不易变形，有利于以后的组织处理。所以组织一旦离体必需及时固定，固定液的量 应为组织的5倍。固定的关键主要与固定的及时性、固定液的选择、固定液的浓度、固定的温度和时间有关。最常用的固定液为10%福尔马林。笔者认为，10%福尔马林由于受到福 尔马林的质量、使用时的挥发和取材时带入的水分影响，浓度被降低致组织固定不足，而高浓度的福尔马林，降低了对组织的穿透性，形成周围固定好而中央固定不到的现象。通 过实践，本人认为以酸性12～15%的福尔马林最佳。大标本（2cm厚）一般需要6～12个小时，小标本一般需要3～6个小时；当室温低18℃时，可在37℃以下的温箱内加温4～6个小时。由于HE染色最佳着色PH为3.5～4.5, 中性福尔马林对苏木素染色有一定影响,细胞核容易发灰,核染色质不佳。所以, 尽管中性福尔马林对抗原有很好的保存作用，但酸性福尔马林对绝大多数抗原来说也有很好的保存作用，所以在没有特别处理的情况下常规HE用12～15%酸性福尔马林也可 以（每100毫升12～15%福尔马林液内加5毫升冰醋酸）。骨髓、结缔组织固定以Bouin液为佳，经Bouin液固定后的组织必须流水冲洗4小时以上。有条件的单位可根据不同要求选用二种或二种以上的固定液；少数单位还可建立组织冷冻库，以便适应各种特殊的处理要求。

       所谓脱水就是利用脱水剂将组织内的水分置换出来，以利于有机溶剂的渗入，这一过程称为脱水。脱水是否彻底，直接关系到组织是否能充分透明，而脱水过度（原因是组织 在纯酒精内时间过久，发生组织质地发生变化）容易造成组织发脆。造成组织发脆的原因还有加温（温度超过35℃）、脱水剂内加有丙酮、浸蜡用的石蜡中二甲苯过多等等。一般 我们总认为组织发脆跟高浓度酒精有关，而忽视了与低浓度的酒精关系，其实低浓度的酒精具有强大的穿透力，比纯酒精更容易渗透到组织块内部使之脱水，组织如果在低浓度酒 精里充分脱水，在高浓度酒精里只需脱去从低浓度到高浓度之间的水份，因此，仅需短时间就可完成，如果这时不缩短纯酒精的时间，便会引起组织发脆；如果脱水时加温，使用丙酮，还可引起组织收缩，并影响免疫组织化学的标记。为了使石蜡浸入到组织块内，必须经过一种既能与脱水剂混合，又能与石蜡相溶的媒介物质，这个过程称透明。目前最好 的透明剂是二甲苯。很多人认为二甲苯极容易使组织发脆，这个观点很片面，在常温下，如果不是时间过长（超过24小时以上）二甲苯并不会引起组织过份发脆，相反会使某些组 织结构比较质韧的组织：比如子宫肌瘤等相当好切），但是当二甲苯温度超过35℃以后，极易引起组织发脆。所以本人认为，大小标本最好分开脱水，一般情况下，大标本脱水时 间（室温18℃）以80%酒精2小时、95%酒精（2道）各1个半小时至2小时、纯酒精（3道）各1个半小时至2小时，二甲苯（2道）各30-60分钟为宜；小标本脱水时间应相应缩短。脱水时间长短，与室温高低有密切的相关。我们在实践中发现，室温在12～15℃时，可作为一个临界温度范围。当室温高于此温度范围时，组织容易脱水，可适当缩短脱水时间；而 室温低于该温度范围时，应适当延长脱水时间（如能保证在一个恒定的温度下最佳）。更换试剂，应以量为基础，定量更换，不能等到切片不好时再去更换。否则，至少会有2～3 批组织切片不好。根据我科经验，如试剂用量为500ml，每500个蜡块更换一次为宜。

      组织透明后，在熔化的石蜡内浸渍的过程称为浸蜡。用其他浸透剂（如火棉胶、明胶等）渗入组织内部的过程可称为浸透或透入。浸蜡温度过高（超过60℃），在蜡内加入二 甲苯蜡或由于透明时带进的二甲苯过多，都会导致组织发硬，还会使组织内的抗原受到破坏；所以作者主张浸蜡用的石蜡熔点在56℃（三道），第一道：石蜡30分钟；第二道：石 蜡90分钟；第三道：石蜡，90分钟。浸蜡温度控制在56～58℃左右。（第一道也可用硬脂酸石蜡1：3混合浸蜡，不仅可软化组织，特别适用于比较韧、硬的组织，而且由于硬脂酸 是弱酸性的，对细胞核有媒染作用，核浆比鲜明，但容易脱片；同时对疏松组织容易散片）。有条件的可以每天打开第一道石蜡的盖子，让二甲苯挥发。浸蜡所用的石蜡如有杂质 尽可能过滤，以防附在组织上，造成切片刀刀口受损，或切片破碎和划痕增多。

      用包埋剂来支持组织的过程，最常用的是石蜡包埋法，包埋的关键一是平整，二是方位。要求在包埋时，应采用镊子轻压组织块拱起部份，使之平贴于底部，通常采用 组织的最大面包埋。囊壁、管腔组织应竖直包埋。小块多颗组织，应尽量放在一起，并保证在一个平面上。修去两边的余蜡（所谓的两边，指切片时与切片刀垂直的两侧）。包埋 时还应注意有无缝线，纸絮，如有一定要去除。胃黏膜活检标本，不能按一般的规律取最大包埋面，应采取窄面竖起包埋。包埋的蜡更应过滤，留有杂质的石蜡，容易造成污染或 刀口受损。蜡的熔点应在56～58℃之间选择，不提倡在冬天使用软蜡。因为用软蜡包埋的蜡块，到了夏天，会粘在一起，不利于资料的保存，而且即使在冬天，用硬蜡包埋的蜡块 也比用软蜡包埋的蜡块要好切。

      展片水温应在42℃至47℃之间，这主要和包埋蜡的熔点有关,水温过高，会引起组织细胞散开，水温过低，切片皱摺无法摊平。包埋蜡中如有二甲苯，也会造成石蜡溶解现象。 而用一次性刀片切的片子，一碰到热水，片子上的皱摺就无法再展开，这有二个方法可以解决：第一、可以在切片时边切边向蜡片吹气，这样的片子就会非常平整，放到热水里就 会自然展开，比较方便快捷，但这样的片子会略微厚一点；第二、在切完片子后，先把切片放在30%酒精水溶液中，让酒精的张力自动把皱摺展开，然后再将切片移到热水，这样的 片子会较薄;如酒精浓度过高，容易引起切片破碎，出现裂隙，像脂肪之类细胞间粘附性较小的组织一碰到酒精就会散开，故不能用此法。最后捞片时玻片要干净，要选择那些完整 、无皱摺的切片，粘贴于玻片中1/3和下1/3的中间。

苯中脱蜡，或将二甲苯放入温箱内预热（37℃左右）脱蜡，最高不得超过60℃。然后经高浓度的酒精到低浓度的酒精洗去二甲苯，至水。

      切片脱水应从低浓度的酒精到高浓度的酒精，80%酒精1道，95%酒精2道，纯酒精2道，（正丁醇1道），二甲苯2道。浓度低的酒精比浓度高的酒精更容易脱水，但也容易使伊红退色，故脱水时间可短一点，每道3－5分钟，纯酒精每道10分钟。为增加酒精与二甲苯的相融性，可在二甲苯前面增加一道正丁醇；石碳酸－二甲苯液也有此效，但用石碳酸时如 不洗净，可引起切片退色，不利于切片久存，故不作推荐。切片经二甲苯透明后，用中性树胶封固。为增加切片的透明度，防止细胞收缩、龟裂或切片出现黑色结晶样小点。所以 我们规定切片必须湿封，不得用温箱烤干或电吹风吹干后干燥封片。在南方冬春、霉雨季节，封片时要防止口鼻呼出的气体接触到切片；在天气较潮湿的日子里，不宜一次将多张 切片取出待封，以免切片“还潮”，形成透明不佳,出现云雾状水珠。脱水剂的更换也应有一定的时间规定。一般是每500ml液体，处理500张切片后更换一次为宜。封片树胶不能过 稀，封片时树胶要均匀充满盖玻片且树胶不及外溢为佳。要将组织全部覆盖，也不能有气泡。最后，粘贴标签，标签必须贴于玻片左侧，编号书写清楚，最好能打印。

      （本文转载丁香通）