四唑盐（MTT）商品名为噻唑蓝
操作步骤
一、接种细胞
1、用胰蛋白酶消化汇合的单层细胞，将细胞收集到含血清的培养基中.
2、离心细胞悬液，使细胞沉积下来.用培养基重悬细胞，计数.
3、将细胞稀释至2.5×103-50×103 个/ml，每个微滴定板可容纳20ml细胞重悬液.
4、用加样器在平底96孔板中间十列的各孔中加入200μl细胞悬液，每孔加0.5×103-10×103 个细胞.
5、将200μl培养基加至第1列和第12列的8个孔中.第1列作读板议的空白对照.
6、将培养板放至塑料饭盒中，于37℃湿润环境中温育1-3天，等细胞进入指数生长期时可加入药物.
二、添加药物
1、用培养基将细胞毒性药物5倍系列稀释，共制备8个浓度.
2、对于贴壁生长的细胞，去除第2-11列各孔的培养基.
3、在第2列和第11列的8个孔中加入200μl新鲜配制的培养基，这些细胞作为对照.
4、在第3-10列的细胞中加入细胞毒性药物.每个药物浓度仅需4个孔，这样A-D行可用于第一种药物，E-H行用于第二种药物.
5、向每组4 孔中各加入200μl药物溶液.
6、将培养板放回塑料盒中，温育至确定时间.
三、生长期
1、在药物作用期结束时，去除所有含有细胞的孔中的培养基，加入200μl新鲜的培养基.
2、每日换液至2-3个PDTs[群体倍增时间].
四、存活细胞数的估算
1、在生长期末，每孔中各加入200μl新鲜的培养基，在第1-11列所有孔中各加入50μl MTT.
2、用铝箔包裹培养板，于37℃湿润环境中温育4 h.
3、弃去孔中的培养基和MTT，在第1-11列所有孔中各加入200μl DMSO，以溶解残留的MTT-甲臜结晶.
4、在含有DMSO的各孔中加入甘氨酸缓冲液（每孔25μl）.
5、立即在570nm处记录吸光值.读板仪用第1 列中含培养基和MTT但不含细胞的各孔调零.
五、分析
以药物浓度为横坐标（X轴），吸光值为纵坐标（Y轴）绘制曲线图.第2列和第11列各孔中得出的平均吸光值作为对照吸光值，对照组吸光值减少一半时所需的药物浓度为IC50 浓度.
