蛋白表达平台
蛋白是生命活动功能执行最重要的大分子
- 细胞和基质结构蛋白和运动蛋白
- 细胞配体结合蛋白,信号转导蛋白和转录因子
- 酶蛋白
- 细胞转运蛋白
- 免疫系统中的抗原和抗体蛋白
- 基因功能研究,基因突变研究,细胞信号转导,基因转录研究
- 蛋白晶体结构学研究
- 蛋白-蛋白相互作用研究
- 酶功能研究
- 用于免疫共沉淀,免疫组化研究抗体制备的抗原蛋白
真核表达系统 –昆虫细胞表达平台
- 有活性的蛋白:昆虫细胞提供较好的蛋白正确折叠和修饰系统
- 蛋白复合物:多个蛋白共表达,表达和纯化制备蛋白复合体
- 易于放大
- 时间:最快可以二个月内得到需要的蛋白
- 最优流程:细胞生长,蛋白表达和纯化工艺流程
- (可选)蛋白活性检测服务
原核表达系统 –大肠杆菌表达平台
- 物美价廉的重组蛋白表达平台
- 丰富的可溶性表达经验
- 周期快:最快3周就能得到目的蛋白
- 最优流程:细菌生长,蛋白表达和纯化工艺流程
客户在重组蛋白定制服务前需要考虑的问题:
1,蛋白本身的特性:蛋白的可能功能,蛋白在细胞内外的定位,蛋白的分子量大小,蛋白可能的结构复杂度,蛋白的翻译后修饰程度,蛋白是否是毒性蛋白分子。
2,下游实验对蛋白活性的要求:不同的研究目的对重组蛋白活性的需要不相同,部分实验需要蛋白功能结构尽可能接近天然蛋白。
3,下游实验对蛋白纯度的要求:蛋白的纯度受蛋白表达量的影响,更高的纯度会需要更多的纯化流程,更长的纯化时间,有可能不利于较好地保留蛋白活性,所以蛋白的纯度和蛋白的活性需要综合平衡考虑;提高蛋白功能assay的特异性可以有效地减少非特异性杂蛋白的干扰。
4,下游实验对蛋白数量的需要:常规的蛋白功能学研究约需要10-100μg重组蛋白,特异性抗体制备约需要2-5mg重组蛋白,药物assay和动物实验可能需要更多数量蛋白。
5,选择合适的蛋白表达系统:不同的蛋白表达系统有不同的优势,需要根据对问题1-4的充分考虑,选择最适合的重组蛋白表达系统。
6,亲和纯化tag的保留:常规小的亲和tag对蛋白功能影响不太,可以保留,也减少去除tag过程对蛋白活性和蛋白得率的不利影响。
7,蛋白保存buffer是否有特别要求:根据蛋白特性和下游实验去除不适合放在蛋白保存buffer中的试剂。