1.探针的标记探针为含有与蛋白特异性结合的中心盒，大约20bp。

    2.非变性电泳

 （1）制备4%非变性胶

 （2）制备样品

 （3）电泳：预跑胶30-60min，100V，上样，跑胶，100V，30min左右

    3.转膜：将胶取下，放在大小相似的尼龙膜上，上下各加1层润湿的blotting paper , 放到半干转移装置上,100V，380mA , 转膜1H.

    4.紫外交联: 取出膜，在紫外交联仪中交联，999.9mJ，固定10min。

    5.洗膜

 （1）将封闭液和4倍洗涤液置于37-50℃溶解。

 （2）用20ml封闭液封闭尼龙膜，温浴15min，摇船轻摇。

 （3）20ml封闭液中加入66.7ul Stabilized Streptavidin-Horseradish Peroxidase Conjugate(1:300稀释)，配制成conjugate/blocking solution。

 （4）将膜从封闭液中取出，在conjugate/blocking solution中轻摇15min。

 （5）将4倍洗涤液用双蒸水稀释成1倍洗涤液。

 （6）将膜置于新的培养皿，用20ml1倍洗涤液冲洗。

 （7）用1倍洗涤液洗膜4次，每次5min，摇床轻摇。

 （8）在新培养皿中加入30ml Substrate Equilibration Buffer,将膜放入，温浴5min，摇床轻摇。

 （9）加入6mlLuminol/Enhancer Solution 和6ml Stable Peroxide Solution, 避光置于锡箔纸包好的烧杯中，摇匀，作为Substrate Working Solution。

 （10）将膜从Substrate Equilibration Buffer中取出，用滤纸尽量吸去液体，放入新的培养皿。

 （11）将Substrate Working Solution用枪慢慢加到膜上使液体尽量到达整张膜，静置5min。

 （12）取出膜，控制膜不能干燥。

 （13）用保鲜膜将膜包好，不能有气泡。

 （14）在暗室中，将膜放入曝光盒，用X-ray胶片压片，曝光。