脂肪氧化酶活性测定

发布人：admin 浏览次数：1268 发布时间：2016-09-23

植物材料，从叶片中提取粗蛋白，0.5g叶片使用液氮研磨，加入到4ml冰预冷提取缓冲液（0.05mol/L PH6.4 磷酸钠缓冲液，1mmol/L EDTA，1%PVP，1mmol/LDTT）中，12，000g，4℃离心10min，取上清进行脂肪氧化酶酶活性分析。

通过检测234nm光吸收（Beckman DU800, Beckman）来测定脂肪氧化酶活性，底物溶液配制：280mg亚油酸，280mgTween-20加入到8mL双蒸水中，上下颠倒混匀，加入1mL 1mol/L NaOH使溶液澄清加双蒸水定容到50mL，-70℃保存备用(Huang, et al. 2005)。2mL反应体系包括：1.93mL 0.1mol/L pH6.4 磷酸钠缓冲液，50μL底物溶液，20μL酶粗提液，同时设立不加酶的空白对照，25℃反应3min，记录234nm光吸收变化。