一、蛙或蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制备
1. 实验原理 蛙或蟾蜍等两栖类动物的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似,而其离体组织生活条件易于掌握,在任氏液的浸润下,神经肌肉标本可较长时间保持生理活性,因此,在生理学实验中常用蛙或蟾蜍坐骨神经腓肠肌离体标本来观察神经肌肉的兴奋性、兴奋过程以及骨骼肌收缩特点等。
2. 实验器材与药品 蛙类手术器械和药品1套,包括:蛙板、小玻板各1块,粗剪刀、直剪刀各1把,大镊子、小镊子各1把,眼科剪刀1把、探针1根、玻璃分针2根,大烧杯、小烧杯各1个,滴管1支,培养皿1个,棉线,任氏液,锌铜叉。
3. 实验方法和步骤
(1)破坏脑脊髓:取蟾蜍一只,用自来水冲洗干净。左手握住蟾蜍,用食指压住头部前端使头前俯,右手持刺蛙针从枕骨大孔向前刺入颅腔(图9-33),左右搅动捣毁脑组织,然后将刺蛙针退到枕骨大孔,不拔出而是将其尖转向后插入脊柱管中捣毁脊髓,插入椎管时,蟾蜍后肢立即失去紧张性,多数情况出现尿失禁。若脑脊髓破坏完全,可见蟾蜍四肢松弛,呼吸消失。
(5)游离坐骨神经和剪断股骨:认清坐骨神经沟和腓肠肌的部位,用剪刀剪断梨状肌及其周围的结缔组织,左手提着神经上的细线,右手持剪刀或玻璃分针沿坐骨神经沟细心剥离,直至将坐骨神经剥离到腘窝。将游离干净的坐骨神经放在下腿上,沿膝关节的周围将大腿的所有肌腱剪断,并用剪刀刮净股骨下段附着的肌肉,在股骨上1/3处剪去上段股骨及所附的肌肉,这样制成的称为坐骨神经下腿标本。
二、离体蛙心标本的制备
1. 标本制备
(1)暴露蛙心:取蟾蜍一只,毁坏脑和脊髓,将其仰卧固定在蛙板上。从剑突下将胸部皮肤向上剪开或剪掉,然后剪掉胸骨,打开心包,暴露心脏和动脉干。
(2)观察心脏的解剖结构:在腹面可以看到一个心室,其上方有两个心房,心室右上角连着一个动脉干,动脉干根部膨大为动脉圆锥,也称动脉球。动脉向上可分左右两支。用玻璃针从动脉干背部穿过,将心脏翻向头侧,在心脏背面两心房下面,可以看到颜色较紫红的膨大部分,为静脉窦,这是两栖类动物心脏的起搏点,观察静脉窦、心房、心室间收缩的先后关系。
三、离体主动脉条
1. 制备方法 取兔或大鼠一只,猛击其头致死,立即剖开胸腔,分离胸主动脉,尽可能于近心脏处把其切断,迅速置于盛有克氏液并通以95%氧气及5%二氧化碳的培养皿中,剔除血管外结缔组织及脂肪,洗去凝血块,轻轻套在较主动脉稍小的玻璃棒上。然后用眼科剪把主动脉作螺旋形剪开,制成宽约3mm、长1.5~2cm的主动脉条,两端分别用线结扎,置于盛有克氏液并通以95%氧气及5%二氧化碳的恒温37℃的麦氏浴管内,平稳90~120min后进行实验。也可把胸主动脉剪成多个宽2mm的动脉环代替血管条做实验。
2. 注意事项
(1)本标本勿用手拿,应以镊子夹取,且不可在空气中暴露过久,以免失去敏感性。
四、离体气管标本制备
1. 气管连环标本 豚鼠1只,体重500g,用木槌击毙,立即从腹面正中切开皮肤和皮下组织,细心分离出气管,自甲状软骨下剪下整段气管,置于盛有Kerbs营养溶液的平皿中,剪除气管周围组织。从软骨环之间由前向后和由后向前进行交叉横切,均不完全切断而保留一小段。从上到下约横切10~15处。然后两端缝上线,一端固定,另一端拉开,即成气管连环。
2. 气管螺旋条标本 将气管由一端向另一端螺旋形剪成条状,每2~3个软骨环剪一个螺旋。亦可用一根直径2~3mm的玻璃棒或竹棒,将气管套在其上,用剪刀剪成或用手术刀切成螺旋状。整个螺旋长条可作一只实验标本,也可用半段螺旋条做一标本。
注意事项:分离气管及制作气管螺旋条标本时,动作要敏捷而轻柔,切勿用镊子夹伤气管平滑肌。
(本文转载丁香通)