乙酰胆碱对鲫鱼离体肠平滑肌的作用

一、前言  

      在生理学实验中，通过学生自主设计实验项目，收集资料完成实验并以论 文格式完成实验报告，有利于学生及时掌握生理学实验的基本内容，旨在培养和提高学生观察、分析、综合、独立思考和解决问题的思维能力。促胃肠动力药 包括很多种类, 这类药物有着不同受体类型和化学结构以及作用机制, 对从食管到结肠的胃肠道的不同部位有着不同程度的促动力作用.这类药物对胃肠道作用机制的研究包括: 胆碱能机制、肾上腺能机制、抗多巴胺和抗胆碱脂酶机制、神 经体液机制等。本实验重在探索通过离体器官实验，建立方法研究药物对M胆碱受体的激动作用和竞争性拮抗作用。M胆碱受体激活剂乙酰胆碱能剂量依赖性地激动肠管平滑肌上的M胆碱胆碱受体，产生平滑肌收缩效应，M胆碱受体抑制 剂阿托品可竞争性拮抗乙酰胆碱对M胆碱受体的激动作用。

一、课题名称：

      静脉注射和口服等量生理盐水对小白鼠尿量的影响。实验目的：通过对小白鼠注射和口服等量生理盐水，了解尿液生 成过程，进一步熟悉掌握肾小管的功能。基本原理：  生理盐水对尿液的影响：加大了血液中水的含量,冲淡了血液,增加人体的排尿量.肾脏为了维持体内水的平衡,通过生成尿液来实现.尿的生成来源于血浆,通过肾小球的滤过,肾小管的吸收,肾小管的徘汇和分泌这三个过程来完成.在这三个过程中,除了生成尿液外,肾脏同时根据体内水分的多少对尿量进行调节,而保持水的平衡,维持人的正常生活. 

二、研究内容 

      1、通过向离体小肠滴加不同浓度乙酰胆碱和阿托品观察小肠平滑肌的收缩曲线变化  

      2、通过生物信号采集系统对鲫鱼收缩曲线进行记录。研究对象  鲫鱼，鲤形目、鲤科、鲫属，是一种主要以植物为食的杂食性鱼，喜群集而行择食而居。鲫鱼分布广泛，全国各地水域常年均有生产，以2～4月份和8～12月份的鲫鱼最肥美，为我国重要食用鱼类之一。   

四、实验药品及设备  

1、试剂和药品：

      乙酰胆碱（mol/L）：1:32000、 1:16000、1:8000、1:4000、1:2000、1：1000  阿托品（mol/L）：3*10-7  Jaeger：氯化钠6.0g、氯化钾0.12g、氯化钙0.14g、碳酸氢钠0.2g、磷酸二氢钠0.01、葡萄糖2.0g、蒸馏水加至1000ml、pH7.2  2. 装置和器材：恒温平滑肌浴槽、计算机生物信号采集系统、万能支架、加液器、纱布、张力换能器、鱼类手术器械一套。

五、实验方法与步骤 

1．离体肠肌的制备 

       猛击鲫鱼头部至昏，立即剖开腹腔，自幽门下5cm剪取空肠和回肠上段，迅速置于Jaeger液中。小心剪去肠系膜，用吸管吸取Jaeger液缓慢冲洗肠内容物；将空肠段分割成2 cm的小段备用，用棉线结扎肠断两端,作为固定肠肌之用。 

2．实验装置  

      将制成的标本一端一端结扎线连于浴槽内的标本固定钩上，另一端连接于肌力换能器的应变片上并与生物信号采集系统的刺激器输出相连，浴池内放20ml Jaeger液。适当调节换能器的高度，使其与标本间的松紧度合适。将肠段完全浸浴在调好温度的浴槽中，并调整好Jaeger充气量(小气泡接连不断)。

实验目的：通过对小白鼠注射和口服等量生理盐水，了解尿液生 成过程，进一步熟悉掌握肾小管的功能。

六、方法与步骤：     

      1、小白鼠抓取、称重、麻醉：抓取3只体型相近、健康指数大致 一致的小白鼠称重，然后用25%氨基甲酸乙酯溶液（按1g/kg或4ml/kg用量），从耳缘静脉注入，小白鼠麻醉成功后，使其仰卧并用绳固定在兔台上备用，并标号、记录数据； 

      2、分别对上述上三只小白鼠进行注射、口服30ml等量生理盐水和空白对照处理；

      3、在胱底部找到并分离两侧输尿管，在输尿管靠近膀胱处用细线结扎，另穿一细线打松结备用，略等片刻，待输尿管充盈后，提起结扎细线，在管壁上用眼科剪剪一小斜口，从斜口向肾脏方向插入口径适当的预先充满生理盐水的输尿管插管，结扎固定，用试管收集尿液。  

      4、三小时后，每隔半小时，观察小白鼠尿量变化（滴/分），做好记录，并绘制成曲线图观察。

      （本文转载丁香园）