微透析技术基本原理

      1微透析技术是一种在体微量化学采样与检测技术，由西班牙之 Delgado 及瑞典之 Ungerstedt 等人于 1972 年自更早的压抽导管（push-pull cannula）改进而来。

      基本原理：选择具有一定截留分子量的纤维半透膜制成的探针埋入待测的组织区域，以恒定速度向探头内灌注与组织液成分相近的等渗灌流液，当灌流液流经探头前端透析膜时，组织内小分子量生物活性物质即顺浓度梯度从膜外扩散入膜内，并随灌流液被引流至探针外，按一定的时间间隔连续收集透析液，检测其中待测生物活性物质水平，可监测该区域内细胞外生物活性物质浓度的经时变化过程。

 

微透析技术的特点和优势

      ★ 空间分辨性高，样品即取即测，可代表取样位点目标化合物的浓度；

 

      ★ 细胞外液采样，真实反映目标化合物的浓度水平；

 

      ★ 透析样品不需预处理，样品中不含蛋白质、酶等大分子物质，可直接测定；

     

      ★ 活体采样，维持机体的完整性，接近生理状态，减少实验动物数量；

 

      ★ 连续采样，可获得药物代谢中间过程的信息；

      ★ 同一生物个体，避免因体液量损失对药物分布及消除的影响；

     

      ★ 样品体积恒定，样品中各成分浓度基本不变，膜对药物的非特异性吸附少；

 

      ★ 损伤小，微创，可在清醒、自由活动的动物上连续取样，且动物本身自成空白对照。

 

动物大脑微透析实验
 
A. 动物麻醉、脑区定位

 

      主要包括

      1-异氟烷（R510-22）

      2-空气泵（R510-29）

      3-小动物麻醉机（R540IE）

      4-脑立体定位仪（68025）
 
      5-定位仪专用麻醉/回收面罩（68666）

      6-麻醉诱导盒（V101）

      7-气体过滤罐（R510-31）

      8-气体回收器（R546W）
 

B. 大脑手术和动物护理

 

C. 微透析-高效液相-电化学在线检测分析 

 

      1-微透析泵（ESP-64）

      2-微量注射器（LTN 1002）

      3-清醒活动装置（TSU-20）

      4-清醒活动笼（BC-80）

      5-微透析探针（C-I-X-Y）

      6-管路（JT-10-100）

       7-管路接头（JB-30）

      8-在线自动进样器（EAS-20s）

      9-HPLC-ECD 一体式检测分析系统（HTEC-510）

     10-工作站（EPC-710）

     11-耗材（分离柱等）
 

操作步骤

 

1、动物准备

    （1）动物麻醉与固定

    （2）备皮

    （3）暴露颅骨
 
    （4）定位调节

    （5）定位钻孔

 

2、植入探针导管

    （1）植入螺丝

    （2）植入导管
 
    （3）牙科水泥固定

    （4）伤口缝合

    （5）动物恢复

 

      2、探针操作时，需要特别细心，避免探针膜的损坏，从而延长探针的寿命和使用次数；

 

      3、探针使用前的预处理，以及在使用间隔期间的处理、冲洗、浸泡，目的也是延长探针的寿命和使用次数；

 

      4、连接管路时，需仔细检查，防止漏液和堵塞，同时也要防止连接管和接头的损坏。

      MD-HPLC-ECD 在线检测分析应用举例
 

微透析-HPLC-ECD 在线检测分析的优势：

      ★ 动物麻醉和清醒状态取样；
 
      ★ 定点连续取样；

      ★ 适用于脑部、脊髓神经、血液、肌肉以及各种软组织取样等；

     

      ★取样过程不破坏动物机体完整性；

      ★ 可透析分析神经递质、单胺类物质、氨基酸和能量代谢物等；

    

      ★ 可利用微透析进行缓解给药；

      ★ 样品纯净度高，不含蛋白质等大分子物质；

      ★ 极小的采样量即可进行定量检测；

      ★ 检测精度高，可达到 fmol、pg 级别；

      ★ 样品采集，检测过程可实现自动化。

     

     (本文转载丁香通）