试剂：

2% 3-氨基丙基三乙氧基硅烷(3-aminopropyltriethoxysilane， Sigma)、丙酮、二甲苯、酸性亚硫酸钠（sodium bisulfite ）、蛋白酶K、2XSSC、0.1M HCl、70%乙醇、85％乙醇、100％乙醇

预处理程序：

1.  将载玻片浸入2% 3-氨基丙基三乙氧基硅烷(3-aminopropyltriethoxysilane， Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) 丙酮溶液中5分钟，随后在丙酮及蒸馏水中漂洗，自然干燥载玻片。

2.  从福尔马林固定石蜡包埋组织中获取多块4微米切片，分别置于以上经氨基烷基硅烷（aminoalkylsilane）处理过的载玻片上。

3.  将组织切片置于65℃下过夜烘烤。

4.  将组织切片浸于二甲苯中室温脱蜡2次，每次10分钟，随后浸入100%乙醇中5分钟。

5.  将组织切片依次室温置于100％乙醇、85％乙醇和70％乙醇中各两分钟复水。将组织切片室温浸入去离子水中3分钟，用无绒纸巾吸取多余的水分。

6.  50℃下用30%[w/v] 酸性亚硫酸钠（sodium bisulfite ）处理组织切片20－30分钟。

7.  于2XSSC溶液中漂洗2次，每次5分钟

8.  取0.4ml蛋白酶K储存液（20mg/ml）溶于40ml 20XSSC(pH 7.0)得到蛋白酶K工作液（200µg/ml）；将组织切片浸泡在蛋白酶K工作液中，37℃下孵育20-30分钟。

9.  组织切片经蛋白酶K消化后，于2XSSC溶液中漂洗2次，每次5分钟。

特别说明：

为确保消化充分，可以自然干燥组织切片，将15µl DAPI复染剂滴加于组织切片区域，立即盖上盖玻片。暗处放置10-20分钟后，在荧光显微镜下选用合适的滤片组观察消化情况。

如果消化过度，可放弃本次FISH实验，选择新的组织切片重复实验，缩短蛋白酶K消化时间；如果消化不充分，可将组织切片浸泡在2XSSC溶液中帮助脱落盖玻片，盖玻片脱落后，于2XSSC溶液中漂洗2次，每次5分钟，然后将组织切片置于37℃蛋白酶K工作液中继续消化5-20分钟；如果消化适中，可将组织切片浸泡在2XSSC溶液中帮助脱落盖玻片，盖玻片脱落后，于2XSSC溶液中漂洗2次，每次5分钟，继续第9步实验操作。

10.  将组织切片置于0.1M HCl中室温浸泡5-10分钟，于2XSSC溶液中漂洗2次，每次5分钟。

11.  将组织切片玻片依次置于-20℃预冷的70%乙醇、85％乙醇和100％乙醇中各2分钟脱水。

12.  将组织切片室温浸入丙酮溶液中2分钟。

13.  自然干燥玻片。

14.  加热玻片至56℃。

15.  按照FISH操作步骤进行FISH实验。

（本文转载丁香通）