当前，microRNA对靶基因的功能研究十分热门。利用荧光素酶报告基因检测实验寻找或验证microRNA对靶点作用性是不可或缺的实验技术。中洪博元可为您提供microRNA报告基因载体构建服务，并可进一步为您提供荧光素酶报告基因检测实验服务。

您只需要提供目的microRNA靶位点序列，我们专业的技术服务人员就可替您完成载体构建，为您节省大量的时间和精力。(服务内容包括：靶位点序列合成、载体构建、细胞转染、荧光信号检测和结果分析。

下图为双荧光素酶报告基因载体表达框架示意图，具有多克隆位点，方便插入目的靶点序列。pmirGLO载体包含萤火虫荧光素酶基因和海肾荧光素酶报告基因。

萤火虫荧光素酶报告基因为主要报告基因。若目的基因表达被抑制，则使萤火虫荧光素酶转录过程受阻，抑制萤火虫荧光素酶蛋白翻译，萤火虫荧光值下降，而作为标准化内参照的海肾荧光素酶的表达不受影响，此时萤火虫荧光素酶活性/海肾荧光素酶活性值下降，从而可以确定miRNA与靶基因是否具有直接调控作用。

图片来源：中洪博元医学实验帮

构建双荧光素酶报告基因实验流程：

构建含靶基因3’UTR的双荧光素酶报告基因载体、microRNA mimics或 microRNA negativecontrol共转染293T或Hela细胞。共转染细胞24-72h后，进行双荧光素酶检测，进一步验确定目的 microRNA的靶基因。

1. microRNA靶点的预测

利用Targetscan,miRDB,PicTar软件预测靶基因3’UTR与microRNA的结合位点。

2. 构建含靶基因3’UTR的双荧光素酶报告基因载体

根据软件预测的靶基因3’UTR与microRNA的结合位点，设计引物PCR扩增靶基因3’UTR序列，或直接进行基因合成，再插入到双荧光素酶报告基因载体上。

3.microRNA mimics和 microRNA negativecontrol的合成

      合成相应的microRNA mimics和 microRNA negativecontrol.

      4.细胞转染准备

      将靶基因3’UTR的双荧光素酶报告基因载体和microRNA mimics或microRNA negativecontrol共转染293T或Hela细胞。

      5.荧光素酶检测

      共转染细胞24-72h后，进行双荧光素酶检测，确定目的microRNA的靶基因。

整理分析数据，得出结论：

      提供有含靶基因3’UTR的双荧光素酶报告基因载体甘油保存菌株一支，microRNA mimics和 microRNA negativecontrol各一只。

附相应的载体的说明书以及实验报告：

包括载体构建过程，载体鉴定记录，测序报告，细胞转染，荧光检测，图表输出和结果分析。