构建以筛选基因新霉素（Neo）取代剔除基因的一个或多个外显子的质粒，转入ES细胞，获得正确发生同源重组的ES克隆。ES细胞进行囊胚注射，获得部分ES来源的嵌合鼠，嵌合鼠与野生型小鼠交配，最终获得来源于重组ES细胞的杂合子小鼠。杂合子小鼠一条染色体上的靶基因exon被Neo基因所取代，杂合子交配获得目的基因失活的纯合子小鼠。