RNA提取心得 

   1.最好新鲜组织，这样RNA提取的效果比较好，这是肯定的。 

   2.如果不是新鲜的（最好在半年之内，-80°或者液氮中冻存的）组织，注意不要反复冻融，从冰冻状态拿到0-4°，注意不要拿到常温，待组织解冻后，用DEPC泡过的剪刀剪一小块组织，称重后，放到预冷的匀浆器中，然后加入一定量的TRIZOL试剂，然后匀浆。注意：速度不要太快，要匀一会挺一会，否则由于摩擦产热，RNA遇热会加速降解。如果一次做多个标本的RNA提取，也要这样做，更不能急。后面的步骤和细胞RNA提取一样。 

二 培养细胞的RNA提取 

悬浮细胞，直接用吸管或者加样枪吹打评壁，以使细胞基本可以被吹下来。然后离心去上清，不需要用PBS洗。 

   2.然后将少量细胞悬液转移到预冷的DEPC泡过的1.5毫升EP管中，然后加入一定量的TRIZOL(细胞多的话加1毫升，细胞少的话加0.5毫升就可以)，然后用枪头吹打混匀5-10分钟。（如果有时间就继续往下做，如果没有时间，可以把加了TRIZOL后的细胞裂解液冻存到-80°，用的时候提取和新的提取的效果一样。）在冰上操作。 

   3.上面的混匀5-10分钟，基本可以使细胞裂解，然后可以进行下面的步骤，详细的步骤我就不介绍了。 

我只介绍一些需要注意的地方。 

   1. 一定要注意冰上操作，低温离心。

   2. 戴口罩和勤换手套，去任何东西都要带着手套去取。 

   3. 每次去器材的时候都要用镊子去夹，镊子要在酒精灯上烧一下。 

   4. 所有的器材都要经过DEPC浸泡后高压后才可以使用，所需要的氯仿，酒精，异丙醇等都保证没有被RNA酶污染，不能用没有泡过DEPC的枪头去提取液体，一定要用DEPC浸泡过的枪头去吸，如果发现试剂有可能被污染了，要立即更换。 

   5. 吸取上清一定不要吸到中间层的蛋白，如果吸到蛋白一定要重新用氯仿抽提，因为，吸到的蛋白很可能会对RNA产生降解作用。一定要少吸，不要贪多，RNA提取不要求量，更多的要求质。 

   6. 最后用75%的酒精洗一次就可以，尽量减少RNA提取时间。 

   7. 最后一步，用DEPC水溶解RNA，不要用太多的体积，以保证RNA的浓度。