1.shRNA序列设计与合成

 （1）客户提供干扰序列；

 （2）针对目的基因中洪代为设计并合成三对特异性的siRNA序列，根据siRNA序列设计对应茎环结构的shRNA序列，然后合成三对shRNA序列（结果中保证其中一条干扰效率不低于70%）。

2.shRNA慢病毒载体构建

 将三个shRNA分别克隆入慢病毒载体，构建shRNA干扰慢病毒载体，并进行测序鉴定构建成功。

二、目的基因干扰慢病毒载体的包装和浓缩

 1.慢病毒载体的大量包装

   大量扩增效率三组shRNA慢病毒载体和慢病毒的辅助质粒，将三个质粒按一定比例大量转染293T细胞，进行慢病毒颗粒的大量包装。

 2. 慢病毒的浓缩

   包装48小时后收集病毒，并对病毒进行体外大比例浓缩，得到有效滴度为10^8PFU/ml的慢病毒颗粒