1、组织取材应规范

用于冷冻切片的组织 ,大小要合适 , 厚薄要均匀。组织块的大小一般为 115 cm x115 cmx012 cm ～115 cm x115 cm x013 cm [ 6 ] 。组织过大 ,切片的阻力过大 ,易产生皱折 ,刀痕 ,造成组织崩解 ,增加切片难度 ,影响病理诊断。反之 ,组织过小 ,破碎 ,则不宜将组织包埋在同一个水平面 ,影响切片操作 ,造成漏诊或误诊。

2、组织标识要明确

重点部位的组织应该标识明确 ,明确组织的包埋方向。可疑肿瘤的范围 ,淋巴结和带有包膜的组织 ,需要将整个切面暴露且含有整个包膜的存在。对于条索状的组织要确定是否为切缘。

3、组织结构要知晓

纤维结缔组织丰富的组织 ,如果逆着纤维纹理切片 ,容易崩裂。脆硬的组织应该主张薄切。脑组织易脱片且含水分较多 ,需要提前用滤纸拭干并准备防脱涂胶片。

4、组织定位要规范 　

囊壁类组织需要竖立包埋 ,且切面含有整个组织面的全层 ,一般可以将几条立埋的囊壁排列在一起卷成“U 字型”,可以帮助囊壁更好保持侧立。组织大小差异较大的 ,应该先包埋大块组织 ,并依靠大块组织摆放小块组织 ,这样可以最快的切到大小不同组织的最大面。细小的组织在包埋时 ,需要将底部垫高 ,防止因为切不到造成切片机损坏。包埋时可以选择先制作一个 OCT冻托 ,在 OCT 接近凝固时 ,将组织快速“种植”包埋进半凝的OCT中。脑组织和脂肪组织应特殊对待。

5、切片固定要及时 　

固定及时是冷冻切片制作的第一要 素 ,固定的最佳时机应在切片后马上将裱好组织切片的载玻 片放进固定液中固定。固定液要保持新鲜 ,经常更换。

6、固定选择要准确 　

甲醇固定时间快 ,细胞收缩小 ,对细胞核和抗原保存较好。缺点是挥发性强 ,毒性较大。95%乙醇是兼有脱水作用的固定液 ,渗透力弱 ,固定速度慢 ,对糖原蛋白固定效果较好 ,能溶解脂类 ,易造成组织细胞收缩。丙酮能使蛋白沉淀 ,渗透力强 ,细胞收缩严重 ,对细胞核固定相对较强 ,对酶的固定较好 ,作用相当于乙醇 ,对糖原没有固定作用。AF液是乙醇和甲醛液混合的固定液 ,兼有乙醇和甲醛液的作用 ,固定的同时有脱水的作用。AAF液与 AF液固 定液作用相似 ,固定同时有脱水作用。因其中多了冰醋酸成分 ,故能迅速固定染色质 ,且固定效果均匀 ,还能抵消一部分乙醇对组织的收缩作用。