Western Blot 即免疫印迹试验，可以利用 Western Blot 来比较在不同条件下，不同细胞组织中目的蛋白表达量的差异，属于定性，半定量试验。既然有差异性比较，参照物必不可少。Western Blot 试验中的标准（表达量）参照物即内参，有了参照物才能准确地比较目的蛋白表达量的差异。内参一般选用管家基因表达的蛋白，它们在各个组织细胞中表达相对恒定，不会因为外部条件变化而引起表达量的变化。而且内参可以监测整个试验体系是否正常，比如蛋白提取过程，转膜体系，显色体系等。

      beta Actin、beta Tubulin、GAPDH、Lamin B1、PCNA 等已作为成熟的内参运用到试验中，下面就大致介绍下如何选择内参：

样本来源

      ● 如果是哺乳动物的组织或细胞，主要以 beta Actin、beta Tubulin、GAPDH、Lamin B1、PCNA 为代表；

      ● 如果是植物样本，主要以 actin、Rubisco 为代表。

目的蛋白定位

      ● 全细胞蛋白和细胞质：beta Actin、beta Tubulin、GAPDH 等；

      ● 细胞核蛋白: PCNA 等；

      ● 核膜蛋白：Lamin B1 等；

      ● 胞膜蛋白：Na(+)/K(+) ATPase 等。

目的蛋白分子量

      beta Actin、beta Tubulin、GAPDH 的分子量分别是 42kd，50kd，37kd，目的蛋白分子量最好能与内参蛋白分子量相差 5kd 以上，才能分开目的蛋白和内参，写文章做图也更美观；

三大内参

      beta Actin，肌动蛋白，细胞骨架蛋白。它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。beta Actin 作为内参是得到公认的，针对大多数组织和细胞来说的，它广泛分布于细胞质内，表达量非常丰富。但是在一些少量特殊的情况下比如脂肪组织和细胞内，beta Actin 的表达量就很少。

      GAPDH，甘油醛-3-磷酸脱氢酶，该酶是糖酵解反应中的一个酶，几乎在所有组织细胞中都高水平表达，在同种细胞或组织中的表达量一般是恒定的，且很少受外部诱导物的影响。但比如缺氧和糖尿病等疾病存在下，会增加
GAPDH 在特定细胞和组织中的表达。

      beta Tubulin，微管蛋白，细胞骨架蛋白。作为内参抗体，beta Tubulin 表达通常不会发生改变，因此被广泛用于 Western Blot 内参，也常被用于免疫染色观察细胞的微管结构。

  （本文转载丁香园）