RNA提取前须知
1、操作中戴口罩和手套
2、清洁无尘环境中操作,试验台、移液器要用75%乙醇擦拭消毒,也可使用RNase抑制剂,操作时避免大声喧哗和频繁走动。
3、玻璃器皿常规洗涤后,应用0.1%焦磷酸二乙酯(DEPC)浸泡处理,然后再用灭菌双蒸水漂洗几次,高压灭菌去除DEPC,160℃烘烤4h。
4、移液器枪头和离心管要经DEPC处理水处理、高压灭菌后使用。
5、提取后的总RNA定量后部分用于反转录,剩余RNA样品标记并用封口膜封口后-80℃可保存数月。
6、配置0.1%DEPC处理水 DEPC是一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂,常用浓度为0.1%。1L配方:DEPC 1ml,蒸馏水 1L,摇床过夜,高压灭菌30min。