酵母总RNA提取方法
发布人：admin
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发布时间：2016-11-02
问： 请问大家提取酵母的总RNA都用什么方法？有好用的试剂盒吗？酵母总RNA提取应该注意什么？
答：使用热酚法抽提酵母RNA,很好用，至今没有失败过。
(1) 将酵母细胞培养在3ml选择性培养基中，30℃过夜旋转培养。
(2) 稀释过夜培养的菌液，重新在10ml培养基中培养细胞。
(3) OD600达到1.0时，收菌，4000rpm/min离心5min,弃培养基。
(4) 将细胞悬浮于400μl AE缓冲液（50mM Sodium Acetate,10mM EDTA 调整pH值至5.2）。
(5) 加入1/10体积的10% SDS，充分混合。
(6) 加入等体积在65℃预热的酸性酚（pH4.5），混合。
(7) 65℃加热5min，冰上放置10min。
(8) 在室温下8000rpm/min离心10min。
(9) 取水相,加入等体积的酚/氯仿/异戊醇（25∶24∶1），10000rpm/min离心8min。
(10) 取水相，加入等体积氯仿/异戊醇（49∶1）10000rpm/min离心8min。
(11) 加入1/10体积3M pH5.2的醋酸钠，2.5倍体积的纯乙醇，-20℃过夜沉淀。
(12) 沉淀样品于4℃离心5min，去除液体。
(13) 在冰上干燥RNA（放置15min），最后用适量DEPC水溶解RNA。
