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细胞培养注意事项

  a.实验进行前,先摆好操作台,开启操作台及无菌室紫外灯灭菌30-60min;


  b.灭菌后关闭无菌室、操作台紫外,并开启日光灯15-20min后打开操作台和无菌室加装滤网的通风系统5-10min以降低臭氧浓度(减少对操作人员的伤害),开始实验。


  c. 实验人员必须穿好实验服,戴好口罩及手套后方可进入实验室。这一方面可以减少无菌室的污染,一方面可以保护实验员的安全。对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作,并选择适当等级之无菌操作台,并且操作期间切不可弄伤手部及接触感染源的皮肤。


  d.实验操作前用75%酒精擦拭工作区域,并应在抬面之中央无菌区域,勿在边缘之非无菌区域操作,在酒精灯附近操作。


  e.实验时避免经过培养皿或试剂瓶上空,小心取用无菌之实验物品,避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口。


  g.为防止交叉污染,细胞培养液(DMEM、RPMI-1640等)应分装标记使用。一种细胞使用对应瓶分装的培养基。


  h.培养基使用前调整温度至37℃。


  I.Trypsin、FBS、NBS应分装使用,避免反复冻融。


  j.经常检查细胞培养箱内的CO2的浓度、温度、湿度等,查看CO2 钢瓶的内外压力表,定期检查操作台及无菌室的通风过滤系统、紫外杀菌灯等,并注意维护,定期更换。

  附:
  紫外线杀菌器:

一、紫外线杀菌器杀菌原理

  是利用紫外线灯管辐照强度,即紫外线杀菌灯所发出之辐照强度,与被照消毒物的距离成反比。当辐照强度一定时,被照消毒物停留时间愈久,离杀菌灯管愈近,其杀菌效果愈好,反之愈差。


  紫外线杀菌灯在紫外线UV-C波段内,其中250-270nm范围内杀菌力最强,由于汞的共振谱线为2537A,这种杀菌管能产生253.7nm的紫外线,使细菌和病毒DNA和RNAV发生变性,细胞不能繁殖。紫外线消毒灯对任何细菌或病毒都有效,集中高强度紫外线在短时间内即可杀菌,广泛应用于空气,种类材质表面,水或其它液体的消毒杀菌。


二、注意事项:


  1.紫外线对皮肤和眼睛会造成灼伤,请注意防护,避免较长时间对人体的直接照射。


  2.紫外线对有机细胞有杀伤作用,请勿对宠物和植物长期照射。


  3.注意地室内名贵书画进行遮挡,以防长时间紫外线照射氧化变色。


  4.勿将杀菌灯作为照明灯使用,消毒以适度为宜,不提倡长时间开着紫外灯。


  5.清洁紫外线灯时,请切断电源,使用干净的软布或酒精轻擦,忌用汽油等有机溶液擦拭。


  6.防止儿童玩耍和接触。


  7.对房间消毒完后,请即开开窗通风。

三、维护保养:


    紫外线灯管表面的灰尘和油垢,会阻碍紫外线的穿透,使用中应注意灯管的擦拭与保洁,新灯管使用前,可先用75%酒精擦拭。使用过程中一般每2周擦拭一次,发现灯管表面有灰尘、油污时,应随时擦拭,保持灯管的污痕和透明,以免影响紫外线的穿透及辐射强度。





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