荧光检测Western Blot本来不是检测的主流方法，因为需要用到紫外检测仪器，不如显色法那么方便普及。而且还有背景的问题。不过荧光法检测允许在同一张转印膜上用不同颜色的荧光底物同时检测不同的目标，所以，对于那些样品来源极其珍贵而又需要检测多种目标的读者来说，或者是2D电泳结果的免疫印迹，DyeChrome Double Western Blot Stain Kit (D21887)算是省事而值得介绍的有趣东西－－一次电泳转膜就可以检测多个靶标。其他人不妨当作课外读物，科普一下。

     这个Double Western Blot Stain其实有3色荧光，包括1）HRP偶联抗兔二抗+Amplex Gold荧光染料检测来自兔子的一抗，不用说，颜色自然是金黄色的了。2）是用AP偶联抗小鼠二抗+ DDAO 检测来自小鼠的一抗，发出的荧光是红色的。2种荧光颜色反差很大，所以很容易区分两种不同的检测目标。检测的灵敏度达到8ng的条带，满足一般的用户需求，又不用压片什么的，只要紫外甚至可见光投射仪都可以看到。为了确保这两个二抗不会发生交叉识别，两个抗体特别用特定的血清预处理过（cross-adsorbed），避免交叉识别，确保检测精确。

     这还没够，试剂盒提供了一种普染的MDPF荧光染料，可以用于染色全蛋白。MDPF共价结合赖氨酸，即使经过反复的免疫印迹操作也掉不下来，经久不息的发出蓝色的荧光，而且也不影响免疫识别和结合（但是就不适合质谱分析或者Edman测序了）检测灵敏度达到4ng的条带。因为在电泳后才染色，染料不影响蛋白的迁移特性。

     用的时候先用MDPF染色10分钟，注意试剂盒建议全程用塑料容器平衡膜而不要用玻璃。然后常规（生物通Western专辑有介绍）封闭，一抗孵育（可以2种一抗共同孵育也可以单独孵育），再和2种二抗混合液孵育，再在含有2种底物的混合液中显色——显色可以根据手头的仪器而选择：如果检测光源在上面则正面向上，如果检测光源在下面则可以正面向下显色，5—20min，通常每15分钟看看怎么样了。如果够了，凉干膜即可，不要洗。用紫外灯、扫描仪或者数码相机都可以拍照，你可以同时看到美丽的3色荧光：蓝色显示全蛋白图像，红色和黄色分别指示两个不同的目标蛋白的结果——不过拍照由于要用滤光镜所以要分3次拍后再合成了。花费如何？Invitrogen的东西，3957元还没打折，可以做20次Mini（9x6）胶，可以同时检测全蛋白＋2 种不同目标，你觉得怎么样？还算良心价了吧？如果实验有这样的需求，该出手的就要出手啦。