转诊：结核性脑膜炎 (TBM) 是最致命的结核病形式，约占所有肺外结核病例的 5所有活动性结核病例的 1? TBM 的患病率和患病率在 4 岁以下儿童和老年人中较高，尤其是重症肺结核和免疫缺陷患者。最近的研究表明，病情恶化的TBM患者在诊断后约40～6个月内死亡。脑部炎症和脑损伤是TBM的主要特征。abbit 成立于 1923 年，作为 TBM 的实验性人类疾病模型。第一个兔 TBM 模型包括蛛网膜下腔注射结核分枝杆菌（可能是 Mtb）、鸟分枝杆菌和牛分枝杆菌。用生理盐水制备的接种物在注射后不会引起可见的反应。然而，接种疫苗后 6 至 15 天，兔脑膜出现结节，出现麻痹等 TBM 症状，然后死亡。这项早期研究证明了人类和兔 TBM 模型在疾病进展和免疫病理学方面的相似性。重要的是，兔 TBM 模型的临床和脑脊液 (CSF) 症状与人类疾病非常相似，其中淋巴细胞占主导地位，蛋白质水平高，脑脊液变得粘稠。此外，基底膜和脑积水增厚是兔 TBM 模型和人类 TBM MRI 的常见异常。

　　为人类 TBM 建立兔子模型

　　我们的研究团队首先使用高毒性 (HN878) 或高免疫原性 (CDC1551) 临床 Mtb 分离株将兔子注射到大脑中。评估了 TBM 的严重程度。本研究使用 TBM 兔模型，该模型首先由 Dacey 和 Sande 发表。在这个模型中，第一天，兔子头骨在麻醉下用四个 0.5 x 2 英寸铝螺钉固定，并在细菌接种前肌肉注射氯胺酮（0.5 mL/kg）和甲苯噻嗪（3.5 mL/kg）。将这些螺钉放置在头骨的额叶、顶叶和枕叶皮质区域。它距颅骨顶部约 1 毫米，距矢状缝约 2 毫米。使用 DuraBase Dental Acrylic 将半螺丝扣头盔放在螺丝上。面罩允许新西兰兔正确放置在立体定位框架中。在第 2 天，通过肌内注射氯胺酮 (0.5 mL/kg) 和甲苯噻嗪 (3.5 mL/kg) 使动物镇静，并使用 0.25 x 4 英寸螺栓将动物的头部牢固地放置在立体定位框架中。有助于穿透水箱进行细菌接种。将 3.5 x 25 G 脊髓针插入水箱，并注入 0.3 mL 的细菌接种液，其中含有大约 5 x 105 CFU。在感染后的指定时间点采集脑脊液和血液样本用于下游分析。

　　以前的方法的基本限制是，将丙烯酸头盔连接到头骨所需的手术可能会引起二次感染。此外，在短时间内（约3天）对动物进行多次镇静，戴上亚克力头盔，接种细菌。金属螺丝和亚克力头盔的放置，以及各种镇静作用，都会给实验动物带来压力。此外，该模型中使用的立体定向装置没有用于固定新西兰兔头部的适配器。新方法的一个重要变化是适配器的使用。非常适用于立体定向镜架，可以牢牢固定新西兰兔进行眼眶内注射。这种方法还通过避免多次镇静程序来减轻对动物的压力。这种方法侧重于通过减轻疼痛和压力来改善动物福利。所有动物操作，包括

　　Mtb 接种，都将在生物安全 3 级 (BSL-3) 设施中进行。以下所有步骤都必须在 II 类生物安全柜 (BSC-2) 中执行。新西兰兔被放置在另一个负压笼中，笼子被放置在负压室中。在进行动物感染实验前，必须在门上悬挂生物安全警示牌，以警告其他人在实验过程中不得进入。个人防护装备：一次性特卫强套装、发帽、护目镜、一次性靴子、双层手套。电动空气净化器 (PAPR) 用于 (a) 受感染的动物、(b) 处理传染性悬浮液和 (c) 尸体解剖。在剩下的过程中，您可以使用传统的95 口罩。

　　动物感染准备：

　　1.在BSL2/BSL3动物设施中，体重2.4至2.6公斤的新西兰白兔被单独饲养和驯化约一周。

　　2.感染当天，新西兰兔被转移到BSL3设施，肌肉注射氯胺酮（35mg/kg）和甲苯噻嗪（5mg/kg）进行镇静。镇静后，通过隔离过滤箱将动物移至手术室。

　　3. 用电动剪刀刮掉新西兰兔头枕骨周围的毛。

　　4. 将动物放置在不锈钢桌子上的立体定向框架上，以方便颅内穿刺。

　　细菌接种的准备：

　　5. 在 1xPBS 无菌盐水中制备结核分枝杆菌悬浮液，浓度约为 5 × 106 cfu/mL。

　　6. 将菌悬液吸入安全柜中的 1cc 注射器中。使用特殊的安全装置移除动物框架旁边的针头。

　　7. 取下 25G 脊椎针的中央导丝，拉回装有接种物的 1cc 注射器的柱塞，在注射器尖端和接种物之间留下大约 0.2cc 的空气屏障。小心地从 1cc 注射器中取出针头并将其正确连接到 25g 脊椎针头上，将保护套留在针头上。将装有脊髓针和细菌接种物的注射器放在有盖的防漏转移容器中，并将容器顶部放在浸泡在消毒剂中的纸巾上。密封容器，用 DeconPLus 擦拭布擦拭外部，并将其放置在立体定位框架旁边。