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【动物实验外包服务】-猴D型逆转录病毒p27基因的原核表达及流式免疫荧光微球检测技术的建立

  目的:构建猴D型逆转录病毒p27蛋白,建立检测猴D型逆转录病毒的流式免疫荧光微球检测技术。

  方法:p27基因片段经PCR扩增,连接pGEX-4T-1表达载体,转化BL21(DE3)表达。 SDS-PAGE 分析蛋白质表达的形态和最佳诱导时间。 GST树脂用于纯化目的蛋白,用磁珠包被,建立流动免疫荧光微球检测技术,用于临床样品检测。

  结果:重组蛋白在可溶性上清液中表达,最佳诱导时间为4小时。包覆磁珠后,我们成功建立了流式免疫荧光微球检测技术。阳性血清在稀释 81 倍后仍可检测为阳性。不与其他猴病原体的阳性血清发生交叉反应,特异性强。 ..可与ELISA法同时使用。测试了二十四个临床样本。其中三个样本的流动免疫荧光微球测试结果为阳性,两个 ELISA 测试结果为阳性,一个为阴性。两种方法均为96?

  结论:成功表达猴D逆转录病毒p27蛋白,利用该蛋白建立流式免疫荧光微球检测技术,灵敏度高、特异性强、样品需求量低,后续多流式用于推广应用。荧光抗体法微球检测技术奠定了基础。

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