目的 树立小鼠肝炎病毒(MHV)实时荧光定量PCR检测办法,并初步应用于实验裸腰鼠等啮齿类动物的检测。
办法 选择MHVE基因激进区域设计合成特异性引物和探针,树立荧光定量PCR办法,并对办法特异度、敏感度、线性、反复性和稳定性停止办法学考证。同时用树立的办法对79只清洁级小鼠、35只SPF小鼠、63只裸鼹鼠、10只长爪沙鼠、20只金黄仓鼠和4只黄鼠停止MHV检测。
结果 胜利树立了MHV实时荧光定量PCR办法;办法的线性范围为(1×101~1×109)拷贝/μL,与仙台(SV)病毒、呼肠孤病毒3型(Reo3)、小鼠肺炎病毒(PVM)、牛冠状病毒(BCV)均无穿插反响,办法的检测敏感度为10拷贝/L。反复性和稳定性实验显现实验间变异系数均小于5%。检测结果显现63只裸鼹鼠、35只SPF小鼠、10只长爪沙鼠、20只金黄仓鼠和4只黄鼠均为阴性。79只清洁级小鼠MHV阳性率为22.78%。树立的办法与RT-PCR比拟,可信度达97.47%。
结论 树立的MHV 荧光定量PCR办法特异、敏感,可以对多种啮齿类动物体内携带的 MHV 停止检测。