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【动物实验外包服务】-禁食时间对昆明小鼠糖耐受和胰岛素分泌的影响

  目的:探讨人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)移植修复卵巢早衰大鼠卵巢功能的作用机制。

  方法:将30只SPF级SD雌性大鼠随机选取10只作为对照组,其他20只大鼠建立POF模型,模型大鼠分为模型组(10只)和hUCMSCs移植组(10只)。观察各组大鼠卵泡情况和卵巢组织超微结构的变化,采用ELISA法检测血清中E2、FSH、AMH、ROS、8-OHdG水平,采用免疫组化和Western blot检测大鼠SOD1及UCP2的蛋白变化。

  结果:HE染色显示:模型组与对照组比较闭锁卵泡数量上升,而生长卵泡数量下降(均P<0.05),hUMSCs移植组与模型组比较闭锁卵泡数量下降,而生长卵泡数量上升(均P<0.05);卵巢电镜观察结果显示:hUMSCs移植治疗后,大鼠卵巢细胞出现细胞核,核膜逐渐恢复,出现少量细胞器;ELISA结果显示:hUCMSCs移植组血清LH、FSH水平、ROS和8-OHdG生成量较模型组明显下降(均P<0.05),而

  目的:为了探寻国内使用量最大的昆明小鼠在特定环境下,OGTT中比较稳定、可靠、合理的禁食时间。

  方法:小鼠口服葡萄糖耐受实验(oral glucose tolerance test, OGTT)是研究其胰岛β细胞功能和血糖调节能力的方法。实验前禁食是必要步骤,但在不同禁食时间下,小鼠的空腹和葡萄糖刺激的血糖浓度、胰岛素浓度存在一定差异。本实验选择6~7周龄大的清洁级昆明雄性小鼠,随机分为四组,分别禁食4、8、10、12h后实行OGTT,检测各组小鼠血糖浓度和胰岛素浓度,并分析血糖浓度和胰岛素浓度的变化趋势。

  结果:(1)所有小鼠血糖浓度和胰岛素浓度均从空腹基准值升至临界值又降至基准值,与禁食4h小鼠的空腹血糖浓度相比,其他三组小鼠的空腹血糖浓度均极显著的低于禁食4h组的血糖浓度(P<0.01)。(2)从血糖来看,禁食10h组血糖浓度从空腹升临界值的上升幅度最大,其血糖曲线下面积与禁食4h组相比存在显著差异(P<0.05)。(3)从胰岛素分泌来看,禁食4h的空腹胰岛素浓度比禁食8h高4%,大约是禁食12h空腹胰岛素的两倍,禁食8h时的胰岛素曲线下面积最小。

  结论:昆明小鼠在OGTT中禁食8~10h,血糖浓度和胰岛素浓度差异大、分辨率高以及变化趋势较好;对禁食时间的安排更加合理,实验计划合理、高效,以后采用昆明小鼠建立糖尿病模型时,糖耐受实验的禁食时间可以此作为参考。

  与对照组、模型组比较,hUCMSCs移植组E2水平明显上升(P<0.05);免疫组化结果显示:与对照组比较,模型组免疫组化UCP-2、SOD1阳性细胞数增加,而hUCMSCs移植组UCP-2、SOD1阳性细胞数较模型组减少;Western blot结果显示:模型组大鼠卵巢组织中SOD1、UCP-2蛋白表达较对照组显著增加(P<0.05),经过hUCMSCs移植治疗后,SOD1、UCP-2蛋白水平较模型组明显下降(P<0.05)。

  结论:hUMSCs移植可通过降低SOD1及UCP-2的表达,从而降低氧化应激反应,最终达到修复卵巢功能的作用。

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