2 间接法又称为荧光抗-抗体法

j 需要两种抗体参与，即一抗和二抗(荧光素标记)。一抗对标本中的抗原来说起抗体的作用，但对荧光标记的二抗来说又起着抗原作用。

–  可用来检测标本中未知抗原，也可检测血清中未知抗体。

k间接免疫荧光法操作步骤

•  标本的处理及非特异染色的封闭同直接法；

•  一抗染色：

–  加未标记的特异性抗体(通常1:100稀释，用0.01MpH7.4的PBS稀释)，37°C作用30min或4°C过夜。

•  0.01M PBST漂洗5min×3次(震荡漂洗)；

•   加荧光标记的二抗抗体，37°C湿盒避光作用30min。

•  0.01M PBST避光漂洗5min×3次(例如包上锡纸，在摇床上漂洗)；

•  甘油缓冲液封片

•  镜检

•  优点：敏感性较高，比直接法高10倍左右；制备一种荧光标记抗体，可应用于多种一抗；

•  缺点：是参加反应的因子较多，产生非特异性染色的机会增多。