石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。

石蜡切片免疫组化优缺点：

石蜡切片免疫组化：

1. 烤片:组织切片入放入75℃烤箱中烤1.5h；

2. 脱蜡:切片在二甲苯放置10min更换二甲苯在放置10min；

3. 水化:将切片依次放入100%乙醇、100%乙醇、95%乙醇和80%乙醇中、纯化水各5min；

4. 抗原修复:将切片放入修复盒中加入抗原修复液(柠檬酸缓冲液)，高压锅加热到自动放气，两分钟后离开热源自然冷却。弃去抗原修复液,将切片用PBS淋洗；

5. 将切片移入湿盒中加入新鲜配制的3%双氧水,以去除内源性过氧化物酶封闭液，室温孵育10分钟，PBS充分淋洗；

6. 滴加正常山羊血清封闭液，室温30分钟，甩去多余液体；

7. 滴加一抗工作液，37℃孵育2h（或4℃过夜），然后PBS充分淋洗；

8 滴加兔/鼠二抗工作液，室温孵育1h，PBS充分淋洗；

9. DAB显色5-10分钟，在显微镜下掌握染色程度 ；

10. PBS或自来水冲洗1分钟 ；

11. 苏木精复染3分钟，盐酸酒精分化,反蓝；

12. 自来水冲洗1分钟 脱水、透明、封片、镜检。

实验问答

问：我的标本是大鼠的脊髓损伤模型的损伤部位，4%多聚甲醛经心灌注固定，后固定4 h，常规脱水、透明、浸蜡、包埋，切片厚度5 μm。但是结果很糟糕，切片上有严重的碎裂。
一张HE染色的切片。这是为什么呢？ 

答：石蜡过脆、刀口过钝、切片太薄、角度不平、还有些组织本身易碎，这些都是可能的原因，需要结合具体情况来测试，可试试加点蜂蜡，软化蜡块。