材料和试剂

      1. 恒温旋转式摇床

      2. 三角烧瓶（容量为1或2L）

      3. 50ml灭菌离心管

      4. 低温高速离心机

      5. SB培养基

      细菌培养用胰化蛋白胨     20g

      细菌培养用酵母提取物      5g

      NaCl                     0.5g

      去离子水                 950ml

      250mmol/L KCl溶液        10ml

       以5N的NaOH调节溶液的pH值至7.0，加去离子水至1L，高压蒸气灭菌。

      6. 20%葡萄糖溶液

      7. 1mol/L MgCl2溶液

      8. 10%甘油

操作步骤

      1. 从新鲜的LB平板培养物中挑选一个TG1克隆，接种于10m1 SB培养基中。

      2. 37℃摇床培养过夜。

      3. 取2.5ml培养物转接于0.5L SB中，另添加10ml 20%葡萄糖和5ml 1mol/L MgCl2。

      4. 37℃培养直到OD600=0.7～0.8。

      5. 将培养物置于冰浴15min，然后4000r/min于4℃离心20min，弃上清。

      6. 将菌体重悬于1/2体积的预冷10%甘油中，4000r/min于4℃离心20min，弃上清。

      7. 重复第（6）步骤。

      8. 将菌体重悬于15ml 10%甘油，并转移至一支50ml的离心管中。3500r/min于4℃离心15min。小心地去掉上清，得到4～5ml细菌。迅速地将其吹打重悬；

      9. 分装成200μl或40μl 的小份，操作应在乙醇/干冰浴中进行。贮存于-70℃。

      10. 用pUC19质粒测试制备感受态细菌的转化效率，应达到109cfu/μg DNA。

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