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细胞增殖生长方面实验

     细胞增殖生长力是判定细胞活力的重要指标,有多种显示方法。

 

实验方法原理

 

     测定细胞绝对增长数值常用最简便的方法。


     一般过程为


     1.  接种21 孔/24 孔板细胞(如用培养瓶时则21 瓶)。


     2.  分7 组,每组3 孔(或瓶),培养一周(7 天),期间逐日检测一组,计数。


     3.  把7 天中的细胞数值绘成图,即为细胞生长曲线。

 

实验材料

 

     细胞

 

试剂、试剂盒

 

     胰蛋白酶

 

 仪器、耗材

 

     吸管

 

实验步骤

 

1.  悬液制备


      取待测生长状态良好细胞,增长至接近汇合时,向培养瓶内加1 ml升0.25 %胰蛋白酶液,37 ℃温箱中消化,至细胞接近脱离瓶壁前吸出消化液、加新的培养液、轻吹打制备成细悬液、计数;

 

 2.  接种


      向每孔中接种等量细胞,置温箱中培养;把培养瓶中营养液倒入试管中并记录下毫升量;

 

3.  计数检测


      从次日起,即开始检测第一组每个孔(或瓶)中的细胞总数,用计算盘或用细胞自动计数器计数,取3 个孔的均值,如此至第7 组结束;

 

4.  绘图


     用座标图纸绘成生长曲线。

 

注意事项

 

     1.  计数法简便易行,但不够精确,约有20 %~30 %的误差。为提高准确性,每孔也应计算2~3 次,则总和每组计算总次数达6 次~12 次,均值可能更为精确。


     2.  细胞数量增加1 倍的时间称倍增时间,亦可从细胞生长曲线中测知。

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