迁移实验（cell migration assay）

实验材料

（1）ThinCert插入式细胞培养器: 24-well, 8.0-μm pore membranes (Greiner 662638) 

（2）细胞培养相关试剂：无血清培养基，10％血清培养基，PBS，0.02％EDTA 

（3）固定液：甲醇

（4）染色液：Giemsa染液

（5）封片剂：中性树胶

（6）其他：小镊子，棉棒，载玻片，盖玻片

操作步骤

（1）所有细胞培养试剂和ThinCert放在37℃温育；

（2）待测细胞培养至对数生长期，消化细胞，用PBS和无血清培养基先后洗涤一次，

用无血清培养基悬浮细胞，计数，调整浓度为2×105 /ml；

（3）在下室（即24孔板底部）加入600－800μl 含10％血清的培养基，上 室加入

100－150μl细胞悬液，继续在孵箱培养24小时；

（4）用镊子小心取出ThinCert，吸干上室液体，移到预先加入约800μl甲醇的孔中，

室温固定30分钟；

（5）取出ThinCert，吸干上室固定液，移到预先加入约800μl Giemsa染液 的孔中，

室温染色15－30分钟；

（6）轻轻用清水冲洗浸泡数次，取出ThinCert，吸去上室液体，用湿棉棒小 心擦去

上室底部膜表面上的细胞；

（7）用小镊子小心揭下膜，底面朝上晾干，移至载玻片上用中性树胶封片；

（8）显微镜下取9个随机视野计数，统计结果。

注意事项

（1）根据待测细胞体积大小选择合适孔径的ThinCert。常用的为8.0-μm孔径

（如AGS细胞），如果细胞体积较大可以考虑用10-μm孔径；

（2）根据待测细胞的迁移能力强弱调整细胞数和迁移时间。常规24-well 

ThinCert接种细胞数约为2≈5×104/well，迁移时间12≈36小时；

（3）由于Greiner公司的24-Transwell内含24个独立的ThinCert，为了避免

操作污染，每次实验可预先另准备一块24孔普通培养板（Greiner）；

（4）如果细胞迁移能力较弱，下室液体可用3T3细胞无血清培养24小时获得的

上清加50μg/ml FN（Fibronectin），具体可查阅相关文献；

（5）细胞悬液加入膜中央，尽量保证液面水平；

（6）固定染色擦洗时动作小心，避免擦去膜底面的细胞。但一定要充分擦净膜

表面上未迁移的细胞，以免影响读数。尤其是膜周边上可用细牙签或小镊
子缠上湿棉花擦洗，但要小心避免将膜戳破；

（7）Chamber和膜上都无法标记，操作时应小心避免混淆实验组和对照组；

（8）充分晾干，避免残留水分导致镜下聚焦不一致。

细胞侵袭实验（cell invasion assay）

实验材料

（1）Matrigel (BD 5mg/ml)，-20℃保存
（2）其余材料同迁移实验


操作步骤

（1）Matrigel在4℃隔天融化；

（2）用4℃预冷的无血清培养基稀释Matrigel至终浓度1mg/ml，冰上操作；

（3）在chamber上室底部中央垂直加入100μl稀释后的Matrigel，37℃温育 

4－5小时使其干成胶状；

（4）后续步骤同迁移实验（1-8）。

注意事项
（1）Matrigel在过高或过低的温度均易凝固，因此操作所需枪头和离心管应提前在4℃
预冷；
（2）铺胶时保证液面水平，胶的厚度均匀一致，切勿产生气泡；
（3）其他注意事项同迁移试验。