4. 带标签的SUMO的制备(以His-SUMO为例)
(1)培养细胞、诱导及收获。
(2)每200ml菌液收获的菌体加入5ml His裂解液,重悬沉淀。
(3)冰浴条件下,超声破碎沉淀。
(4)4℃,10000rpm,离心1h,
(5)取上清液,加入Ni-NTA agarose,4℃,混合1-2h。
(6)将混合物装柱用His洗涤液洗涤,直到检测不到蛋白浓度。
(7)His洗脱液进行洗脱,按洗脱次序每管收集500ul。
(8)考马斯亮蓝染色检测蛋白。