异丙醇  

   1. DNA不溶于异丙醇，加入异丙醇减少DNA溶解度，使得DNA析出。使得dna 和少量蛋白质析出产生白色絮状沉淀。降低分子运动，易于形成沉淀。静置时间越长DNA得率越高 。溶液一成分：SNETSDS十二烷基磺酸钠：可破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白与DNA分离

   NACL 调节盐离子浓度

   EDTA 螯合金属离子，抑制DNA酶

   Tris盐酸 酸碱平衡

   溶液二：异丙醇溶液三：灭菌注射用水。（为什么在整个DNA提取过程中沉淀DNA需要冰冷的异丙醇或者乙醇？常温的有什么样的影响？因为低温可以促进DNA的沉淀，在DNA量很少的情况（比如你的实验）可以提高抽提效率。不过如果DNA量较多时，常温也没问题）

   1，样本离心后粘液，杂质多，用枪吸出部分溶液，尽量上清去干净。

   2，  样本中血液，杂质较多时用细胞保存液，PBS，灭菌注射用水蒸馏水，清洗一遍。

   3，  煮沸时切勿让管盖爆开，加热裂解的时间可适当延长到20分钟。

   4，  加热后，样本离心10分钟为佳。

   5，  加模板时，尽量将枪头保持在液面靠上的位置。

   6，  血液，杂质较多样本加样前可按5-10倍比例稀释模板，在进行扩增。

一步法提取DNA:

   特殊样本用细胞保存液清洗一遍

   1,提取500UL样本 （可适量减少 ）

   2. 14000RPM 离心7分钟，去上清

   3.加入50UL 裂解液 震荡混匀

   4.加热17分钟

   5.14000RPM离心7分钟

   6.特殊样本，模板稀释5-10倍，再加样

   1，  建议按人份混合酶和MIX混合液，剩余分开保存。如混合好的试剂勿反复冻融，防止酶失活。

   2，  pcr管有无问题，保存适当

   3，  扩增仪升降温有无问题，各孔间温差，扩增程序。

   1，  变性时间，冰水温度，PCR管内产物有无挥发，管底产物要浸入冰水至少2分钟。

   2，  杂交时间适当延长到15min

   3，  加样用枪吹打几次，使模板与杂交液混匀。