石蜡组织DNA的提取方法
发布人：admin
浏览次数：1601
发布时间：2017-01-19
哺乳动物DNA的分离通常是在有EDTA及SDS一类的去污剂存在下用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提而实现的。这一方法获得的DNA，其大小（100—150kb）适用于Southern分析和用λ噬菌体构建基因组DNA文库。
石蜡块切片10um/片×10，放入5ml离心管
↓加1ml二甲苯，37℃，5′（脱蜡）
4000rpm×15′
↓
小心吸去二甲苯
↓
重复上述步骤3次
↓
加入无水乙醇1ml，静置5′
↓4000rpm×15′
吸去乙醇
↓
重复一次
↓
自然干燥
↓
加1mlPBS
↓
加入1ml DNA 抽提液
↓37℃，1小时
（200ug/ml）蛋白酶10-15ul
↓55℃，水浴，过夜
加入0.1 M Tris 平衡液（pH 8.0）2ml
↓12000rpm×15′
吸上清，加入酚/氯仿（1：1）混合液2ml
（氯仿为24：1的氯仿/异戊醇）
↓12000rpm×15′
吸上清，加氯仿2ml
↓12000rpm×15′
3M 醋酸钠150ul，-20℃预冷无水乙醇3ml，颠倒数次
↓
离心，弃上清
↓
抽干
↓
100ul去离子水稀释，-20℃保存
试剂配制：
1. DNA抽提缓冲液配方
10 mM Tris•Cl (pH 8.0)
0.1M EDTA (pH 8.0)
配好灭菌后加
RNase 至 20ug/ml
0.5% SDS
