技术类型 | 传统ES打靶技术 | TetraOneTM打靶技术 | TAELN | CRISPR/Cas9 |
技术方法 |
ES细胞的同源重组 囊胚注射 |
TetraOneTM ES细胞同源重组TetraOneTM注射技术 |
核酸酶技术 原核注射 |
核酸酶技术 原核注射 |
DNA载体 | 利用同源臂进行同源重组,并利用正负筛选基因,筛选阳性克隆 | 利用同源臂进行同源重组,并利用正负筛选基因,筛选阳性克隆 |
TALE vector pair/FokI-dimer nuclease TALEN识别序列和FokI酶 |
gRNA vector/Cas9 nuclease gRNA识别序列和Cas9核酸酶 |
基因随机插入与脱靶效应 | 无 | 无 | 会有一点概率的随机插入和脱靶效应(取决于TALEN识别序列) | 会有一点概率的随机插入和脱靶效应(取决于gRNA识别序列) |
结果再现性 | 非常好 | 非常好 | 一般 | 一般 |
制作周期 | 8-12月 | 6-8月 | 5-7月 | 5-7月 |
技术应用的研究范围 | 完全性基因敲除,条件性基因敲除,基因定点插入,点突变研究,人源化研究 | 完全性基因敲除,条件性基因敲除,基因定点插入,点突变研究,人源化研究 | 完全性基因敲除,基因定点插入,点突变研究,人源化研究 | 完全性基因敲除,基因定点插入,点突变研究,人源化研究 |
物种限制 | 小鼠 | 小鼠 | 无 | 无 |
成果保证 | 有 | 有 | 基因敲除有保证,其他用途有不确定性 | 基因敲除有保证,其他用途有不确定性 |
技术流程要点 | DNA打靶载体,ES阳性克隆,细胞注射,嵌合体鼠获得,F1鼠获得,纯合鼠获得 | DNA打靶载体,ES阳性克隆,细胞注射,去Neo杂合子鼠,纯合鼠获得 | 载体构建,F1杂合子鼠(大鼠与小鼠)获得 | 载体构建,F1杂合子鼠(大鼠与小鼠)获得 |
筛选繁殖 | 无需特殊工作,可以直接进行后续试验 | 无需特殊工作,可以直接进行后续试验 | 需要排除马赛克现象对后续生殖遗传的影响,并排除脱靶效应的影响 | 需要排除马赛克现象对后续生殖遗传的影响,并排除脱靶效应的影响(KI需要考虑随机插入的影响) |