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制备动物模型的基因修饰技术之不同的基因修饰技术对比分析



技术类型 传统ES打靶技术 TetraOneTM打靶技术 TAELN CRISPR/Cas9
技术方法 ES细胞的同源重组
囊胚注射
TetraOneTM ES细胞同源重组TetraOneTM注射技术 核酸酶技术
原核注射
核酸酶技术
原核注射
DNA载体 利用同源臂进行同源重组,并利用正负筛选基因,筛选阳性克隆 利用同源臂进行同源重组,并利用正负筛选基因,筛选阳性克隆 TALE vector pair/FokI-dimer nuclease
TALEN识别序列和FokI酶
gRNA vector/Cas9 nuclease
gRNA识别序列和Cas9核酸酶
基因随机插入与脱靶效应 会有一点概率的随机插入和脱靶效应(取决于TALEN识别序列) 会有一点概率的随机插入和脱靶效应(取决于gRNA识别序列)
结果再现性 非常好 非常好 一般 一般
制作周期 8-12月 6-8月 5-7月 5-7月
技术应用的研究范围 完全性基因敲除,条件性基因敲除,基因定点插入,点突变研究,人源化研究 完全性基因敲除,条件性基因敲除,基因定点插入,点突变研究,人源化研究 完全性基因敲除,基因定点插入,点突变研究,人源化研究 完全性基因敲除,基因定点插入,点突变研究,人源化研究
物种限制 小鼠 小鼠
成果保证 基因敲除有保证,其他用途有不确定性 基因敲除有保证,其他用途有不确定性
技术流程要点 DNA打靶载体,ES阳性克隆,细胞注射,嵌合体鼠获得,F1鼠获得,纯合鼠获得 DNA打靶载体,ES阳性克隆,细胞注射,去Neo杂合子鼠,纯合鼠获得 载体构建,F1杂合子鼠(大鼠与小鼠)获得 载体构建,F1杂合子鼠(大鼠与小鼠)获得
筛选繁殖 无需特殊工作,可以直接进行后续试验 无需特殊工作,可以直接进行后续试验 需要排除马赛克现象对后续生殖遗传的影响,并排除脱靶效应的影响 需要排除马赛克现象对后续生殖遗传的影响,并排除脱靶效应的影响(KI需要考虑随机插入的影响)


 
      综合上表,不同的基因修饰的技术有不同的使用方向,研究者应该依据自己的需求,谨慎进行选择。
      (本文转载丁香通)
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