技术类型 | 技术原理 | 随机插入现象 | 脱靶现象 | 马赛克现象 |
传统ES打靶技术 | 大片段的同源重组 | 可以排除所有的随机插入,所有随机插入的克隆都可以被Southern Blot检测到并排除 |
无脱靶风险 因为同源重组技术是一个极度保守的技术,只有几个碱基的差异就同源重组发生的概率就会大大下降 |
无 动物由单一克隆发育而成,修饰的基因型一致 |
TALEN技术 |
KO:核酸酶定点切割 KI:核酸酶定点切割后产生DNA断口,相对提高该位点的短片段同源重组效率 |
无法排除风险 特别是在做KI的应用时候,线性化的DNA会产生较高概率的随机插入 |
无法排除风险 TALEN识别序列较短,获得的动物必须进行脱靶效应的检测 |
存在 如果核酸酶起作用不是在胚胎的单细胞阶段,就会出现一个动物有多种修饰基因型的现象 |
CRISPR/Cas9技术 |
KO :核酸酶定点切割 KI:核酸酶定点切割后产生DNA断口,相对提高该位点的短片段同源重组效率 |
无法排除风险 特别是在做KI的应用时候,线性化的DNA会产生较高概率的随机插入 |
无法排除风险 gRNA识别序列较短,获得的动物必须进行脱靶效应的检测 |
存在 如果核酸酶起作用不是在胚胎的单细胞阶段,就会出现一个动物有多种修饰基因型的现象 |
TetraOneTM 技术 | 大片段的同源重组 | 可以排除所有的随机插入,所有随机插入的克隆都可以被Southern Blot检测到并排除 |
无脱靶风险 因为同源重组技术是一个极度保守的技术,只有几个碱基的差异就同源重组发生的概率就会大大下降 |
无 动物由单一克隆发育而成,基因型一致 |