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猴D型逆转录病毒p27基因的原核表达及流式免疫荧光微球检测技术的建立-【动物实验外包服务】

  目的:构建猴D型逆转录病毒p27蛋白,建立流式免疫荧光微球检测技术,以检测猴D型逆转录病毒。

  方法:通过PCR扩增p27基因片段,与pGEX-4T-1表达载体连接,转化成BL21(DE3)并表达。 SDS-PAGE分析蛋白质表达的形态和最佳诱导时间。 GST树脂用于纯化目标蛋白,用磁珠包被,并建立用于临床样品检测的流式免疫荧光微球检测技术。

  结果:重组蛋白在可溶性上清液中表达,最佳诱导时间为4小时。涂覆磁珠后,我们成功建立了流式免疫荧光微球检测技术。稀释81倍后仍可将阳性血清检测为阳性。它不会与其他猴子病原体的阳性血清发生交叉反应,并且具有很强的特异性。 它可以与ELISA方法同时使用。测试了二十四个临床样品。其中三个样品的流动免疫荧光微球检测结果为阳性,ELISA检测结果为两个阳性,其中一个为阴性。两种方法的检出率为96%。

  结论:成功地表达了猴D逆转录病毒p27蛋白,并利用该蛋白建立了高灵敏度,高特异性,低样品需求量的流式免疫荧光微球检测技术,并随后用于多流,用于推广和应用。荧光抗体法微球检测技术奠定了基础。

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