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miRNA Northern Blot实验技术应用

       MicroRNA(miRNA)是真核生物中一类长度约为20-25nt(核苷酸)的非编码单链RNA分子,在生物进化过程中高度保守,约占整个基因组基因总数2%。大量研究表明,miRNA在多种生物过程中起关键作用,包括细胞的发育、分化、增殖和凋亡等;并且功能研究已证实多种miRNA分子与肿瘤发生、发展过程相关,miRNA具有类似于致癌基因或抑癌基因的作用。


       最早被发现的两个miRNAs——lin-4 and let-7被认为是通过不完全互补结合到目标靶mRNA3'非编码区端,以一种未知方式诱发蛋白质翻译抑制,进而抑制蛋白质合成,阻断mRNA的翻译。也有miRNA可以与目标靶基因完全互补,从而抑制基因的表达,提示miRNA可能包含和 siRNA类似的作用方式。


       随着miRNA研究的不断深入,各种研究方法层出不穷,包括miRNA芯片、Real time-PCR、Northern Blot、RNA酶保护实验等等。而在这些方法中最经典方法的当属miRNA Northern Blot,miRNA Northern Blot具有结果直观、可靠等方面的优势,因此许多SCI杂志要求miRNA方面的研究需提供Northern Blot实验结果。


       美国Signosis的miRNA Northern Blot检测试剂以其简便的实验操作步骤为广大研究人员所称道,特别是基于专利技术开发的高敏miRNA Northern Blot检测试剂,因其能够检测到低丰度的miRNA而成为美国Signosis的明星产品。。使用美国Signosis开发的miRNA Northern Blot试剂发表了很多高水平的SCI文章,下面通过对其中几篇文献的分析来向大家详细介绍美国Signosis miRNA Northern Blot检测试剂。


       1、文献一:Effect of miR-23 on Oxidant-Induced Injuryin Human Retinal Pigment Epithelial Cells

       该文章中,作者使用miRNA Northern Blot检测试剂检测正常以及AMD病变的RPE细胞中miR-23a的表达情况。如上图所示,实验结果条带清晰,明显可见在不同样本中miR-23a的表达差异。


       2、文献二:Functional analysis of microRNAs in humanhepatocellular cancer stem cells

       使用miRNA Northern Blot检测试剂分析不同样本中miR-181a和let-7a的表达情况。从上图可以看到,两种miRNA的表达量在正常HepG2细胞中表达量很低,而在N-LSC、HSC-SR、HSC-DF中表达量依次上升。从图中可以看到,即使是使用普通的miRNA Northern Blot检测试剂,也可以清楚地检测到低表达的miRNA。


       3、文献三:Characterization of the stress associated microRNAsin Glycine max by deep sequencing

       该文章使用的是Signosis高敏miRNA Northern BlotmiRNANorthern Blot检测试剂,检测了不同样品中的多个miRNA表达,结果中可以清晰地看到低丰度的miRNA条带,同时高表达miRNA条带形状也很美观,没有聚集成一团。Signosis高敏miRNA Northern Blot检测试剂可以清楚分辨miRNA表达差异,特别在检测灵敏度较普通的高出1到2个数量级。


       从上面三篇文献的Northern Blot实验结果来看,Signosis研发的普通及高敏miRNA Northern Blot检测试剂效果是稳定的。整套试剂包含实验所有组分,客户只需相应的仪器即可完成实验所有步骤。可以清晰的检测到低丰度miRNA,同时也不会影响到对高丰度miRNA的检测。


       (本文转载丁香通)

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