免疫染色
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发布时间：2016-11-28
免疫染色
1．将膜置封闭液中，室温摇晃30～60分钟，封闭非特异性结合位点。
2．用封闭液稀释特异性抗体，根据抗体的量预先确定稀释度，通常1：100～1：10 000之间。将膜从封闭液中取出，置抗体稀释液中，室温摇晃反应30～60分钟。用封闭液洗涤膜4次，每次10分钟。
3．用封闭液稀释结合碱性磷酸酶（或辣根过氧化物酶）的第二抗体，根据抗体的量预先确定稀释度，通常在1：200～1：2 000之间。将膜置酶标记抗体稀释液中，室温摇晃反应30～60分钟。用封闭液洗涤膜4次，每次10分钟。
4．用50ml TBS洗涤膜，去除磷酸和Tween 20。在底物液中显色10～30分钟，注意观察显色情况。显色完成后，用大量双蒸水洗涤膜终止反应。观察结果并照相。
