一、非特异性染色的识别:
常出现在组织边缘、胶原纤维及血浆渗出处,坏死组织及固定不良的组织中心处。表现为弥漫性,均匀性的背景染色。也可以是随机分布的阳性反应产物点、团或块状。
二、非特异性染色的原因及避免方法:
1. 静电吸附
抗体是一种带负电荷的球蛋白,容易和带正电荷的组织相结合
2. 内源性过氧化物酶
红细胞,粒细胞的含量尤其高,镜下可以识别,不要将其当成阳性结果。
3. 洗涤不彻底
保证各步骤的PBS或TBS冲洗的时间和量,方法要得当,最好可以把切片放在装满洗液的染色盒内浸泡一段时间以确保充分清洗。有一些人鉴于实验经费紧张,那吸管滴加标本上冲洗,这样很难保证冲洗的干净与否。这实际是千里之堤,溃于蚁穴。
4. DAB显色反应时间过长
最好是在显微镜下时时观察一避免显色回见过长而引起的非特异性染色背景
5. 一抗稀释液,可以在一抗稀释液内适当添加1%BSA或合适浓度的二抗来源的血清。
以上是本人将亲身实验经验,加上网上资料以及舜百公司帮助而总结出的一些非特异性染色原因分析和控制的,希望能给各位提供一些帮助和指导!