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白细胞介素8(IL- 8)检测实验


    Il-8是一种分子量为8~10kD的多肽,对嗜中性粒细胞,T淋巴细胞、嗜硷性粒细胞具有趋化作用,并可激活嗜中性粒细胞,是一种重要的炎症介质。在严重感染病人的血清中、炎症局部渗出液中都可检测到高水平的IL-8。

    一、实验方法:夹心法ELISA


    二、实验原理:采用两株识别不同表位的抗IL-8单克隆抗体,其中一株(4D7)作为包被抗体,以识别和结合待检标本中的IL-8,另一株作为酶标抗体,与结合于包被抗体的IL-8的另一个表位结合并催化底物显色。


    三、实验材料:抗体、标准品、ABTS


    四、试剂、试剂盒:缓冲液、PBS


    五、仪器、耗材:ELISA板


    六、实验步骤:

    1.  包被
    pH9.5 碳酸盐缓液稀释4D7单克隆抗体粗提γ球蛋白至1 μg/ml,加入96
孔板,100 μl/孔,放4 ℃,36 小时。


    2.  封闭
    0.1 %吐温PBS(Buffer A)冲洗96孔板三次,加3 %BSA Buffer A(Buffer B)
200 μl/孔,放37 ℃,1 小时。

    3.  加待检样品
    Buffer A 冲洗96孔板三次,加待检样品及Buffer B 稀释的标准品100 μl/
孔,放37 ℃,3 小时。

    4.  加酶标抗体
    Buffer A冲洗96孔板五次,3 %PEG Buffer A稀释酶标抗体至1∶800,加
入96孔板,100 μl/孔,放37 ℃,1 小时。

    5.  显色
    Buffer A冲洗96孔板五次,pH5.4柠檬酸缓冲液溶解底物(ABTS)),0.2 mg/
ml,加3 %H2O2,2 μl/ml,加入96孔板,100 μ/孔,室温下或37 ℃显色。
    七、注意事项:
    1.  待检标本如为血清,应采用一次性容器,血液采集后尽快(6小时以内)分离血清。

    2.  封闭液或抗体稀释液应新鲜配制或冻存。
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