方法一:
1、 白片(石蜡切片)放于处理好的载玻片上,烤片60度1h(此载玻片未经粘片剂处理)
2、 二甲苯5min *3
3、 异丙醇5min *3
4、 乙醇96%、90%、80%、70%、50%各3min
5、 双蒸水洗3min*3
6、 丙酮洗3 次
7、 APES胶立式染缸1-3min
8、 丙酮洗
9、 双蒸水冲3次
10、 PBS洗5min
11、 3%双氧水10-15min
12、 PBS洗5min
13、 抗原修复(微波加热法)
14、 PBS冲5min*3次
15、 非免疫性动物血清50ul封闭
16、 甩去血清,加入50ul一抗,室温下60min
17、 PBS冲洗5min*3次
18、 加入50ul二抗,室温下20min
19、 PBS冲5min*3次
20、 ABC复合物50ul,室温下20-30min
21、 PBS冲5min*3次
22、 DAB显色液3-10min
23、 双蒸水洗1min*2次
24、 苏木素复染0.5-1min
25、 自来水洗30min
26、 封片
方法二:
1、 白片放于处理好的载玻片上,烤片60度5d (此载玻片经粘片剂APES处理)
2、 二甲苯5min *3
3、 异丙醇5min *3
4、 乙醇96%、90%、80%、70%、50%各3min
5、 双蒸水洗3min*3
6、 双氧水10-15min
7、 PBS洗5min
8、 抗原修复(微波加热法)
9、 PBS冲5min*3次
10、 非免疫性动物血清50ul封闭
11、 甩去血清,加入50ul一抗,室温下60mi
12、 PBS冲洗5min*3次
13、 加入50ul二抗,室温下20min
14、 PBS冲5min*3次
15、 ABC复合物50ul,室温下20-30min
16、 PBS冲5min*3次
17、 DAB显色液3-10min
18、 双蒸水洗1min*2次
19、 苏木素复染0.5-1min
20、 自来水洗30min
21、 封片
抗原修复用微波加热法:
1、0.01M柠檬酸—柠檬酸盐缓冲液放入微波炉内加热至沸腾
2、脱蜡水化后组织置于耐高温塑料切片架上,放入已沸腾的缓冲液中,再中档继续处理15min
3、取出波炉盒,室温放置20min
4、取出切片架,用PBS冲洗3次,后滴加50ul非免疫性动物血清