原理

　　微核试验是一种快速的方法，可检测干扰细胞有丝分裂的染色体损伤或化学毒物。微核是存在于细胞主核之外的颗粒。大小对应于孔直径的1/20至1/5、它具有圆形或杏仁形。其染色与细胞核一致。在相间细胞中发现。显示一个或多个。由于细胞染色体的破坏或纺锤丝的影响，微核通常被认为是有丝分裂后期保留在核外的遗传物质。因此，微核试验可以检测由化学毒素或物理因素引起的染色体完整性改变和染色体分离改变的遗传终点。微核可以出现在多种细胞中，但是在有核细胞中，很难将它们与正常的核叶和神经突区分开。在成熟前最后一次分离后数小时，红细胞可以排泄主核，但它们保留PCE细胞中的微核，因此通常要对PCE细胞中的微核进行计数。

　　设备试剂

　　1设备手术刀，手术剪刀，无牙钳，弯曲小止血钳，干净的纱布，带橡胶尖的吸管，台式离心机，带刻度的离心管，干燥架，吹风机，玻璃蜡笔，玻璃染缸，2 ml注射器和针头，玻璃滑动器和推杆，时钟，带油镜的显微镜，细胞计数器。

　　2种试剂甲醇（分析纯），甘油（分析纯），小牛血清，盐水，吉姆萨原液（吉姆萨染料1克，甘油66毫升，甲醇60毫升。首先在研钵中收集染料。加入少量甘油，混合并研磨，将剩余的甘油分批倒入，继续研磨，然后转移到烧杯中，盖上玻璃观察杯，在60°C的水浴中放置2小时，取出并冷却，加入甲醇，混合，放置2周，然后在阴凉处储存，同时通过棕色瓶过滤，储液储存时间越长，染色效果越好pH值为6.8的磷酸盐缓冲液使用该溶液制备10％的涂料溶液），磷酸盐缓冲液pH 6.8。

　　（1）I/15mol/L磷酸二氢钾（KH2PO4）溶液：称量049.06g KH2P04（分析纯），溶于蒸馏水并稀释至1000ml。

　　（2）1/15mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4）溶液：分析纯的Na2HPO4、9.45g（或Na2HPO4？2H2011.87g;

　　a2HPO4？7H2017.87g;a2HPO4？12H2023.88g ）重量溶于蒸馏水，稀释至1000毫升。

　　（3）pH 6.8磷酸盐缓冲液：取50.40 ml的1/15 mol/L磷酸二氢钾溶液和49.60 ml的1/15 mol/L磷酸氢二钠溶液，将两者混合均匀将会给予。

　　3、阳性对照是环磷酰胺或丝裂霉素C。

　　操作步骤

　　1、试验动物和治疗方法（1）动物选择：常用的试验动物是大鼠和小鼠。小鼠使用最广泛，体重在18至20克之间，年龄在7至12周之间。每组有10只小鼠，雄性一半，雄性一半。

　　（2）接触途径：根据研究目的或所测试化学毒物的性质，可以选择口服，皮肤，呼吸和注射途径。但原则上，应尽可能使用与人体接触化学毒物相同的方法。

　　（3）接触次数和采样时间：研究证实，化学毒物需要以特定浓度在靶器官中积累才能产生诱变作用。由不同化学毒物引起的微核峰时间也不同。波动范围可以达到24到72小时。这就要求在接触化学毒物后设置不同的采样时间点。考虑到上述两个原因，建议使用多次曝光。其中，4次曝光更方便合理。也就是说，连续4天和5天每天采样一次。这样，采样时间可以覆盖24到72小时的峰值。如果高峰延迟了96个小时，您将不会错过。 （4）剂量选择：除溶解度限制外，所测试化学毒物的最大剂量应达到最大耐受剂量。通常，有3至5个或更多剂量组，并且剂量覆盖范围应达到3位数或更多。同时，应建立阳性对照组和阴性对照组。可以给阳性对照组进行一次或两次腹膜内注射环磷酰胺（50-100 mg/kg）或丝裂霉素C（10 mg/kg）。阴性对照组使用相同量的溶剂。

　　2、骨髓液的制备和涂片最后，用毒物感染试验动物后，根据确定的时间通过颈脱位或麻醉将其杀死，将四肢固定在解剖板上，将腹部的中线附着在头发上，并切开胸部。腹部说。取出胸骨，擦去血液，除去肌肉，切断骨phy，然后用弯曲的小止血剂在干净的载有小牛血清滴的载玻片上挤压骨髓，充分混合后再滑动。按。杀死动物后，用手术剪刀快速去除两条腿的股骨，去除肌肉，用盐水冲洗血液和碎肉，切掉两端的骨头，并去除2 ml的骨头。使用注射器连接针头并吸取小牛血清。插入骨髓腔，将骨髓倒入离心管中，用移液管将骨髓团匀浆，以1000/min的速度离心10分钟，弃去多余的上清液，留下约0.5 ml与沉淀物混合的滴管用于在干净的玻璃载玻片上绘制水滴并将其按下。阳性和阴性对照组如上所述同时治疗。

　　3、将固定和干燥的骨髓切片放入染色罐中，用甲醇溶液固定15分钟，取出并干燥。无法及时染色的涂片也需要纠正和保存。

　　4、固定并干燥后，将涂片染色并准备新鲜的涂片。用Giemsa涂料溶液（1份Giemsa储备液+ 9份pH 6.8磷酸盐缓冲液）染色10至15分钟后，在载玻片上漂洗染色溶液并将其放在干燥架上干燥。

　　5、首先在低倍显微镜下观察和计数，然后选择分布均匀和染色良好的区域，然后在油镜下观察和计数。 PCE细胞为灰蓝色，阳性染色的红细胞（NCE）为橙色。细胞中所含的大多数微核是圆形的，边缘光滑且有序，发色性与核质为紫红色或紫罗兰色一致。一个或多个微核可能出现在细胞内。计算包含1000个PCE的微核的PCE数量，以及包含200个细胞的PCE与NCE的比率。

　　结果的分析和评估

　　在该实验中，仅对PCE微核进行计数，并且微核比率以每1000个表示。每只动物都是观察的单位。计算每组雄性和雌性动物的平均微核PCE。如果雌性和雄性动物之间没有明显的性别差异，则可以将计算结果进行合并。否则，必须分别执行计算。正常的PCE/NCE比率约为1（正常范围为0.6-1.2）。小于0.1的比率意味着PCE的形成被显着抑制，所测试的化学毒物的量太高并且测试结果不可靠。阴性和阳性对照中微核的发生率应与实验中使用的物种和菌株的报告结果或研究的历史数据相一致。测试由微核测试获得的数据的频率分布尚无定论，各种统计方法（泊松分布，二项式分布，X2测试等）用于测试结果的统计分析。该测试的重要步骤是良好的骨髓涂片和高质量的染色。