由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲瓒的有机溶剂对实验者也有损害。关于MTT法，上次中洪君也有推送过：实验专栏丨这5年做MTT实验的总结都在这儿了。

为此，Oween等设计出了一种新型的MTT类似物一MTS，MTS法原理同MTT法，但优于MTT法。MTS在PMs(Phenazinemethosulfate)的存在下可被活细胞还原形成水溶性的甲增产物(故MTS需与PMS合用)，因而被用来建立了可检测细胞活力和增殖能力的MTS检测法。 MTS形成的水溶性甲腊产物在490~500nm处有最佳吸收，我们一般选择492nm。每孔检测的细胞数量在3000~5000为宜，作用一小时后即可检测，以3小时的检测结果为最佳。

与MTT法相比，MTS有以下优点

➤ 1、操作简便，MTS中生成的甲脂极具水溶性，省去了MTT法需离心除去上清液和加入有机溶剂这一步骤，可一次检测大量样品。 

➤ 2、MTS易于配制和储存，在PH>6.5的缓冲溶液中易溶解配成溶液，且可在4 ℃下保存一段时间。 

➤ 3、快速，加入药后一小时即可检测结果（2-3小时为最佳），而MTT法的作用4个小时。 

➤ 4、敏感，比MTT法测定统一样品敏感性高。 

➤ 5、特异性强，MTT法形成的甲增产物为桔黄色，培养体系中一些黄色代谢产物和试剂均可影响检测结果，而MTS/PMS法形成的甲增产物为深棕色检测时外部因素影响较小，所以特异性较强。 

➤ 6、重复性良好。

MTS法的原理：

还原为黄色的Fo图为MTS被乳酸脱氢酶rmazan

MTS检测细胞增殖protocol:

1）收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul，铺板使待测细胞调密度3000~5000/孔，5%CO2，37℃孵育。 

2）24小时后吸去培养基，每孔加入100ulMTS溶液，即MTS母液与培养基比例为1:9，继续培养1-3h。在酶标仪OD492nm处测量各孔的吸光值。 

3）连续检测3天，每天3复孔，在酶标仪OD490nm处测量各孔的吸光值。 

4）记录3天的各孔吸光值，使用GraphPad prism软件计算细胞增殖曲线。

MTS操作注意事项：

1、MTS需避光，所以操作时应注意避光。 

2、培养过程中换液，如果培养时间较长，应适当更换细胞培养液，补充营养物质。

3、防止边缘效应，96孔板边缘应该滴加PBS，边缘孔的水分挥发较快，药物易被浓缩，对实验影响大。边缘孔加入PBS 溶液后能够在一定程度上保持实验组的水分。

中洪实验室细胞增殖检测法推荐

1、细胞类型，如果是悬浮细胞，MTT方法则不适用，MTT需要吸取上清后再加入DMSO溶解甲臜，而悬浮细胞不贴壁，容易造成结果不准确 。

2、细胞数，如果细胞数少于500，则推荐使用基于ATP的检测方法，该方法较为灵敏，能够检测很少的细胞数。

3、检测时间，如果实验时间不允许，需要短时间出稳定准确的实验结果，推荐采用基于其他氧化还原酶的检测和基于ATP的检测方法。

4、药物处理。如有药物处理，且药物具有氧化性，则不推荐MTT， 氧化性的药物会和MTT发生氧化还原反应而影响MTT法的试验结果。另外如果药物带有颜色，推荐采用基于ATP的检测方法。

5、高通量筛选。推荐采用MTS，CCK-8这两种方法，操作较为简单，且价格便宜。但如果是药物的高通量筛选，且药物处理时间较短，带有颜色，推荐采用基于ATP的检测方法。

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