想要验证细胞裂解是否成功？

进行总蛋白定量吧！

想将多个样品进行平行实验比较/标准化保存？

还是进行总蛋白定量吧！

对于每种分析方法的兼容性，研究人员有必要评估检测样品的类型，检测范围和样本量，是否有合适的分光光度计，以及每个检测所需的时间和成本。

中洪实拍图

下表总结了常用的总蛋白定量分析方法：

它们总蛋白定量分析的详细步骤，中洪君就不一一说明了。今天，我们详说常用的Bradford和BCA法的区别和各自的优缺点。

BCA法

该方法可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20、60、80。但该方法受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇(DTT)低于1mM，β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于0.01%。

优点：

测定快速简便，45分钟内完成

准确灵敏,检测浓度为5-200 mg/ml

干扰物质少，BCA法不受大部分样品中的去垢剂等化学物质影响，可兼容样品中高达5%的SDS，5%Triton X-100,5%的Tween 20

在一定浓度范围内，有良好的线性关系

检测不同蛋白质分子的变异系数小于考马斯亮蓝法蛋白定量

缺点：

与荧光蛋白质定量等方法相比，属于化学呈色法的BCA法检测灵敏度尚不够

蔗糖、尿素、NH4+和EDTA影响测定结果

Bradford法：

该方法样品中β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)的浓度可高达1M，二硫苏糖醇(DTT)的浓度可高达5mM。但该方法受略高浓度的去垢剂影响，需确保SDS低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20、60、80低于0.015%。

优点：

灵敏度高，检测简便，实际简单，干扰物至少。

缺点：

1、由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此考马斯亮蓝染色法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差，在制作标准曲线时通常选用 g-球蛋白为标准蛋白质，以减少这方面的偏差；

2、仍有一些物质干扰此法的测定，主要的干扰物质有：去污剂、 Triton X-100、十二烷基硫酸钠 (SDS) 等。